Поликлональное антитело кролика против убиквитина для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФ/ИКК, ИФА - P0CG47

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация убиквитина

• Убиквитин кодируется геном UBB и продуцируется в виде полиубиквитина-B, белка-предшественника, который процессируется с образованием зрелых мономеров убиквитина. Убиквитин — это высококонсервативный белок из 76 аминокислот, участвующий в посттрансляционной модификации белков-мишеней.
• Убиквитин существует либо в ковалентно присоединенном к другим белкам состоянии, либо в свободном (незаякоренном) виде. В ковалентно связанной форме он конъюгирован с белками-мишенями через изопептидную связь, образуя мономеры (моноубиквитин) или полиубиквитиновые цепи, связанные через различные остатки лизина (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) или линейные цепи, связанные через инициаторный Met.
• Различные типы сшивки полиубиквитиновых цепей определяют разные клеточные исходы: цепи, связанные через Lys-48, направляют белки на протеасомную деградацию, в то время как цепи, связанные через Lys-63, участвуют в эндоцитозе, ответах на повреждение ДНК и сигналинге NF-kappa-B. Другие типы сшивки (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) участвуют в репарации ДНК, ERAD, регуляции клеточного цикла и модификации киназ.
• Помимо конъюгированных форм, свободные незаякоренные полиубиквитиновые цепи также играют сигнальные роли, например, активируя протеинкиназы и модулируя другие сигнальные пути.
• Убиквитин локализуется в нескольких субклеточных компартментах, включая цитоплазму, ядро и наружную мембрану митохондрий, что отражает его широкое участие в клеточных процессах.
• Посттрансляционные модификации самого убиквитина включают фосфорилирование и АДФ-рибозилирование, которые могут модулировать его функцию. Белок содержит изопептидную связь и является частью пути конъюгации Ubl.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген охватывает полноразмерный убиквитин (аминокислоты 1-228), соответствующий предшественнику полиубиквитина-B. Ожидается, что это поликлональное антитело будет распознавать как свободный убиквитин, так и убиквитин-конъюгированные белки, но оно также может детектировать полиубиквитиновые цепи. При Вестерн-блоттинге рекомендуется использовать денатурирующие и восстанавливающие условия для различения мономерного убиквитина от полиубиквитиновых конъюгатов.
• Для ИГХ-П демаскировка антигена может улучшить детекцию, а использование соответствующих контролей (например, образцов с нокдауном или нокаутом) желательно для подтверждения специфичности. Сигнал может быть диффузным из-за широкого распространения убиквитина.
• В ИФ/ИКК методы фиксации и пермеабилизации следует оптимизировать, поскольку локализация убиквитина варьируется в разных компартментах. Совместное окрашивание с маркерами органелл может помочь в интерпретации.
• Протоколы ИФА должны включать стандартные кривые с использованием рекомбинантного убиквитина для количественного определения уровней свободного или общего убиквитина. Убедитесь, что антитело валидировано для конкретного формата анализа и типа образца.
• Антитело демонстрирует предполагаемую широкую перекрестную реактивность. Для нечеловеческих видов проверяйте реактивность в соответствующей системе образцов, поскольку гомология последовательностей высока, но может варьироваться.

CamelBio: Ваш мост для комплексных поставок

CamelBio предлагает комплексное решение для поставок сырья для ИВД, поддерживая производителей диагностических средств, исследовательские лаборатории и институты с помощью валидированных пар антител, оптимизированных поликлональных и моноклональных антител, объемных вспомогательных реагентов и поставок сырья для редких мишеней. Это антитело против убиквитина поддерживает исследования в области деградации белков, клеточной сигнализации и изучения биомаркеров заболеваний. CamelBio может помочь в масштабировании или кастомизации материалов для удовлетворения потребностей вашего проекта — от концепции до клиники.