Кроличье поликлональное антитело к триметилированному гистону H4-K20 для WB/IHC/IF (P62805)

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация гистона H4

Гистон H4 является одним из коровых гистонов, составляющих нуклеосому — фундаментальную повторяющуюся единицу хроматина. Вместе с гистонами H2A, H2B и H3 он образует октамер, вокруг которого оборачивается примерно 147 пар оснований ДНК, компактизируя геном в ядре и регулируя доступность ДНК. Гистон H4 играет центральную роль в регуляции транскрипции, репарации ДНК, репликации ДНК и хромосомной стабильности. Динамическая модуляция структуры хроматина в значительной степени достигается за счет сложного набора посттрансляционных модификаций (ПТМ) на гистоновых хвостах, в совокупности называемых "гистоновым кодом". Связанные ссылки: UniProt P62805

Гистон H4 в основном локализован в ядре и ассоциирован с хромосомами. Ацетилированный H4 также обнаруживается в ядре на определенных стадиях сперматогенеза (сперматиды 11-й стадии). Связанные ссылки: UniProt P62805

Остаток лизина 20 гистона H4 (H4K20) подвергается множественным состояниям метилирования, включая моно-, ди- и триметилирование. Триметилирование H4K20 (H4K20me3) является признаком конститутивного гетерохроматина и участвует в сайленсинге генов, ответе на повреждение ДНК и регуляции клеточного цикла. Эта модификация динамически регулируется метилтрансферазами (например, SUV4-20H1/2) и деметилазами. Многочисленные другие ПТМ на H4 были идентифицированы с помощью масс-спектрометрии и других методов, что подчеркивает сложность регуляции гистонов. Связанные ссылки: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический пептид, соответствующий триметилированному региону K20 гистона H4 человека. Ожидается, что это антитело будет специфично распознавать H4K20me3, однако перекрестную реактивность с другими состояниями метилирования H4 или немодифицированным H4 следует исключить экспериментально с помощью соответствующих анализов конкурентного связывания пептидов или моделей нокаута/нокдауна.
• Для детекции методом вестерн-блоттинга (WB) в качестве типа образца рекомендуются ядерные экстракты, обогащенные гистонами, или гистоны, экстрагированные кислотой. Оптимизируйте концентрацию первичного антитела (например, начните с 1:500–1:2000) и используйте подходящий конъюгат вторичного антитела.
• При иммуногистохимии (IHC-P) для повышения доступности эпитопа может помочь процедура демаскировки антигена с цитратным буфером (pH 6.0) или EDTA-буфером (pH 8.0); оптимизируйте метод демаскировки эмпирически.
• Для иммунофлуоресценции (IF/ICC) рекомендуется пермеабилизация 0.1–0.5% Triton X-100 или дигитонином. Условия фиксации (например, 4% PFA) могут влиять на доступность эпитопа; протестируйте различные протоколы.
• При использовании в анализах ELISA или дот-блоттинга (DB) рассмотрите возможность использования планшетов, блокированных BSA, и биотинилированной системы детекции для повышения чувствительности.
• Всегда включайте отрицательный контроль (например, немодифицированный пептид H4 или контроль IgG) и валидируйте специфичность антитела в соответствующей системе образцов с помощью масс-спектрометрии или других ортогональных методов.
• Антитело демонстрирует предсказанную широкую перекрестную реактивность (Человек, Мышь, Крыса и другие), однако рекомендуется валидация для каждого интересующего вида.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем, исследовательским лабораториям и разработчикам IVD комплексный портфель высококачественных исходных материалов, включая валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, а также вспомогательные реагенты в больших объемах. Для целей эпигенетических и хроматиновых исследований, таких как триметилированный гистон H4 K20, мы предлагаем надежные решения по поставкам для ускорения вашего процесса разработки анализов. Свяжитесь с нашей командой, чтобы обсудить потребности в разработке индивидуальных антител, крупных заказах или поиске редких мишеней.