Кроличье моноклональное антитело к триметил-гистону H4-K20 (P62805) для вестерн-блоттинга, иммуногистохимии на парафиновых срезах, иммунофлуоресценции/иммуноцитохимии

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация гистона H4

Гистон H4 является основным компонентом нуклеосомы, фундаментальной повторяющейся единицы хроматина. Он оборачивает и уплотняет ДНК, тем самым ограничивая доступность для клеточных механизмов, которым требуется ДНК в качестве матрицы. Следовательно, H4 играет центральную роль в регуляции транскрипции, репарации ДНК, репликации ДНК и хромосомной стабильности. Связанные ссылки: UniProt:P62805

N-концевой хвост гистона H4, включая лизин 20 (K20), подвергается множеству посттрансляционных модификаций — ацетилированию, метилированию, фосфорилированию и другим, — которые составляют "гистоновый код". Эти модификации динамически регулируют структуру хроматина и экспрессию генов. Связанные ссылки: PMID:12086618, PMID:17967882

В частности, триметилирование по лизину 20 (H4K20me3) является хорошо охарактеризованной эпигенетической меткой, в основном ассоциированной с конститутивным гетерохроматином, способствующей сайленсингу генов и поддержанию стабильности генома. Эта модификация катализируется метилтрансферазами, такими как SUV420H1 и SUV420H2. Связанные ссылки: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882, PMID:32209475

На субклеточном уровне гистон H4 преимущественно локализован в ядре и хромосомах. Во время сперматогена ацетилированный H4 демонстрирует усиленное удержание в ядре сперматид на 11-й стадии. Связанные ссылки: UniProt:P62805

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Поскольку это антитело распознаёт метилирование-специфичный эпитоп, убедитесь, что буферы для блокирования и отмывки поддерживают стабильность метильной группы. Можно использовать обезжиренное сухое молоко или БСА, но избегайте жестких условий денатурации (stripping), которые могут изменить модификацию.
• Для вестерн-блоттинга рассмотрите возможность использования кислотно-экстрагированных гистонов или лизатов, обогащенных ядерной фракцией, для усиления сигнала гистоновых модификаций, и проводите образцы в высокопроцентном (15% или градиентном) SDS-ПААГ для оптимального разрешения белка H4 с молекулярной массой 11 кДа.
• В иммуногистохимии на парафиновых срезах стандартные методы демаскировки антигена (например, цитратный буфер, pH 6.0) обычно совместимы; однако проводите валидацию на срезах тканей, известных экспрессией метки H4K20me3, таких как гетерохроматиновые регионы.
• Для иммуноферментного анализа (ELISA) или дот-блоттинга включайте неметилированные и моно-/ди-метилированные пептидные контроли для подтверждения специфичности к триметильной форме.
• Рекомбинантный моноклональный формат кроличьего антитела обеспечивает высокую воспроизводимость для долгосрочных исследований; валидируйте коэффициенты разведения в вашей соответствующей системе образцов.

CamelBio: Ваш мост для комплексного снабжения

CamelBio — ваш надежный партнер по комплексному снабжению сырьевыми материалами для in vitro диагностики (IVD), предоставляющий производителям диагностических систем и исследовательским лабораториям беспрепятственный доступ к валидированным продуктам антител, таким как это кроличье моноклональное антитело к триметил-гистону H4-K20. Наш обширный портфель включает оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела, валидированные пары антител и объемные вспомогательные реагенты, адаптированные для применения в эпигенетике и биологии хроматина. Для мишеней с ограниченной коммерческой доступностью CamelBio специализируется на поиске редкого сырья, соединяя глобальные инновации от концепции до клиники с надежными решениями поставок.