Кроличье моноклональное антитело к триметил-гистону H3-K27 (Q16695/P68431) для Вестерн-блоттинга, ChIP и CUT&Tag

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация гистона H3

Гистон H3 — это основной белок гистона, который вместе с H2A, H2B и H4 образует нуклеосому — фундаментальную повторяющуюся единицу хроматина. Нуклеосомы наматывают и уплотняют ДНК, тем самым контролируя доступность генетической информации для клеточных механизмов, отвечающих за транскрипцию, репликацию и репарацию. Эта центральная роль делает гистоны ключевыми регуляторами геномной стабильности и экспрессии генов.

Функциональная универсальность гистонов в значительной степени опосредована разнообразием посттрансляционных модификаций (PTM), collectively referred to as the "гистоновый код". Эти модификации — включая ацетилирование, метилирование, фосфорилирование и другие — происходят в конкретных остатках и регулируют динамику хроматина. Среди них триметилирование гистона H3 по лизину 27 (H3K27me3) является устоявшейся репрессивной меткой, связанной с формированием факультативного гетерохроматина и долгосрочным сайленсингом генов.

Это кроличье моноклональное антитело было получено против синтетического триметилированного пептида, охватывающего K27 человеческого гистона H3 (на основе NP_003520.1). Оно специфически распознает гистон H3 только при триметилировании по K27, что позволяет точно обнаруживать эту эпигенетическую метку в различных анализах.

Связанные ссылки: PMID:16267050, PMID:17194708

Экспериментальное руководство и технические советы

• Иммуноген представляет собой синтетический триметилированный пептид в области K27; следовательно, ожидается, что это антитело будет обладать высокой специфичностью к триметилированному состоянию. Рекомендуется подтвердить специфичность с помощью дот-блоттинга или анализов конкуренции пептидов, используя немодифицированные, моно-, ди- и триметилированные пептиды.
• Для Вестерн-блоттинга (WB) рекомендуются ядерные экстракты, богатые гистонами, или экстрагированные кислотой гистоны. Прогнозируемая полоса составляет ~15 кДа. Используйте соответствующие контроли загрузки (например, общий H3 или антитело к C-концу гистона H3) для нормализации загрузки белка.
• В иммунопреципитации хроматина (ChIP) это антитело можно использовать для обогащения регионов хроматина, отмеченных H3K27me3. Оптимизируйте фрагментацию хроматина и концентрацию антитела для каждого типа клеток. Включите положительные (например, локусы генов HOX) и отрицательные (например, промоторы генов домашнего хозяйства) контрольные регионы в анализ qPCR.
• Для CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation) антитело может служить в качестве первичного для таргетинга и in situ расщепления. Следуйте протоколу производителя для методов на основе бусинок или прямого связывания. Геномный анализ может выявить распределение H3K27me3 по всему геному.
• В иммунофлуоресценции (IF/ICC) и иммуногистохимии (IHC-P) ожидается ядерное окрашивание. Оптимизируйте условия фиксации (например, 4% PFA для IF, парафиновые срезы фиксированной формалином ткани для IHC) и пермеабилизации. Блокировка сывороткой/BSA может минимизировать фон.
• Всегда валидируйте антитело в соответствующей системе образцов и контексте применения. Титруйте антитело и включайте соответствующие контроли для обеспечения воспроизводимости результатов.

CamelBio: Ваш мост для комплексных закупок

CamelBio выступает комплексным партнером по закупкам сырья для IVD, связывая звено между открытием реагентов и клиническим применением. Для исследований в области эпигенетики и биологии хроматина мы предлагаем валидированные моноклональные и поликлональные антитела, такие как это Триметил-гистон H3-K27 кроличье мАб, а также оптимизированные пары антител, вспомогательные реагенты оптом и поиск редких мишеней на заказ. Нужна ли вам воспроизводимость от партии к партии или помощь в масштабировании диагностического теста, CamelBio стремится поддержать весь ваш цикл разработки от концепции до клиники.