Поликлональное антитело кролика к триметилированному гистону H3-K14 (Q16695 / P68431) для ВБ, ИФ, ИЭИ

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация гистона H3

Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы — фундаментальной единицы организации хроматина. Вместе с H2A, H2B и H4 он формирует гистоновый октамер, вокруг которого обвивается ДНК. Это обеспечивает упаковку генома и регулирует доступность ДНК для взаимодействия с белками. Данная структурная роль гистонов центральна для таких процессов, как регуляция транскрипции, репарация ДНК, репликация ДНК и поддержание стабильности хромосом. Функция гистона H3 динамически регулируется сложным набором посттрансляционных модификаций (ПТМ), включая ацетилирование, метилирование, фосфорилирование и другие, которые объединяют понятием «гистоновый код». Эти модификации изменяют структуру хроматина и служат сайтами связывания для эффекторных белков.

Гистон H3 локализуется преимущественно в ядре и распределен вдоль хромосом. Существует несколько вариантов гистона H3: канонические H3.1 и H3.2, не зависящий от репликации H3.3 и тестикулярно-специфичный H3.1t (кодируется геном H3-4/HIST3H3). Согласно данным UniProt, вариант H3.1t (Q16695) специфически экспрессируется в клетках яичка, тогда как основной вариант H3.1 (P68431) экспрессируется во всех тканях. Обе изоформы имеют высокую идентичность последовательности и подвергаются аналогичным ПТМ.

Остаток K14 гистона H3 является известным сайтом нескольких ПТМ, включая ацетилирование (H3K14ac) и метилирование. Триметилирование H3K14 (H3K14me3) является недавно открытой модификацией, которая может играть роль в регуляции хроматина и экспрессии генов. Данное антитело получено против синтетического пептида, охватывающего N-концевой хвост (аа1–100) — область, которая выступает из нуклеосомы и несет на себе большую часть модификаций. Оно специфически выявляет триметилированную форму K14.

Связанные источники: UniProt Q16695 UniProt P68431

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует N-концевому хвосту (аа 1–100) гистона H3 человека. Данная область высоко консервативна, что объясняет прогнозируемую широкую перекрестную реактивность. Однако, поскольку антитело нацелено на специфическую ПТМ (триметил K14), рекомендуется проводить валидацию в используемой системе клеток или тканей для подтверждения реактивности и специфичности.
• При Вестерн-блоттинге гистоны прочно связаны с ядерной ДНК, поэтому экстракция кислотой или протоколы обогащения гистонов могут улучшить результат детекции. Используйте подходящие контроли загрузки (например, общий H3 или H4) для нормализации различий в количестве внесенного образца.
• При иммунофлуоресценции/ИЦК фиксация параформальдегидом с последующей пермеабилизацией Тритоном X-100 обычно дает хороший результат для ядерных мишеней. Однако эпитоп может быть чувствителен к избыточной фиксации; оптимизируйте время фиксации и концентрацию детергента.
• Поскольку антитела, специфичные к ПТМ, могут проявлять некоторую перекрестную реактивность с другими модификациями, рекомендуется использовать анализ конкурентного связывания с пептидами (например, предварительная инкубация антитела с пептидом триметил K14 в сравнении с немодифицированным или моно/диметил пептидом) для подтверждения специфичности в условиях вашего эксперимента.
• ИЭИ указан как разрешенное применение; для покрытия планшета можно использовать гистоновые пептиды или очищенные нуклеосомы. Убедитесь, что при покрытии эпитоп K14me3 доступен в достаточной степени.

CamelBio: ваш единый центр по снабжению реагентами

CamelBio выступает как комплексный партнер по закупкам сырья для ИВД, предлагая решение для одномоментного поиска и закупки всех необходимых реагентов, которое ускоряет разработку ваших диагностических продуктов от концепции до клинических испытаний. Помимо данного кроличьего поликлонального антитела к триметилированному гистону H3-K14, CamelBio предоставляет валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела к различным гистоновым модификациям, вспомогательные реагенты в больших объемах и индивидуальный поиск сырья для редких мишеней. Независимо от того, разрабатываете ли вы анализы по биологии хроматина или тесты на эпигенетические биомаркеры, портфель продуктов CamelBio покрывает потребности ваших исследований и производства за счет надежных логистических цепочек, готовых к аудиту.