кроличий моноклональный анти-человеческий антитело к фосфо-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 mAb — P27986 / O00459 / Q92569

Основные характеристики и параметры продукта

Биологическая справка: Функция и локализация регуляторных субъединиц PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• PIK3R1 кодирует регуляторную субъединицу p85α PI3K, которая существует в виде нескольких изоформ (p85α, p55α, p50α) вследствие альтернативного сплайсинга. Изоформа p85α является полноразмерным белком, в то время как более короткие изоформы лишены N-концевого SH3-домена и гомологичного региона BH. Данное антитело распознает фосфорилированные формы всех трех продуктов генов: PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) и PIK3R3 (p55γ).
• Регуляторные субъединицы связываются с активированными (фосфорилированными) протеинтирозинкиназами через свои SH2-домены, функционируя как адаптерные молекулы, которые привлекают каталитическую субъединицу p110 к плазматической мембране, тем самым активируя передачу сигналов PI3K. Связанные ссылки: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• Регуляторные субъединицы PI3K необходимы для инсулин-стимулированного поглощения глюкозы и синтеза гликогена в инсулиночувствительных тканях, таких как скелетные мышцы и печень. Они также опосредуют передачу сигналов ниже рецепторов факторов роста (FGFR1-4, PDGFR, KIT) и интегринов ITGB2. Связанные ссылки: PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α модулирует клеточный ответ на стресс эндоплазматического ретикулума (ЭР), способствуя ядерной транслокации изоформы 2 XBP1 в зависимости от стресса ЭР и/или инсулина, особенно при метаболической перегрузке в печени, тем самым улучшая толерантность к глюкозе. Связанные ссылки: PMID:20348923
• Субъединицы p85α/p85β/p55γ преимущественно цитоплазматические, где они ассоциируются с каталитической субъединицей p110. После активации они перемещаются к плазматической мембране для локализации голофермента PI3K вблизи его липидных субстратов.
• Посттрансляционные модификации включают фосфорилирование по нескольким остаткам тирозина (например, Y467 у p85α, Y464 у p85β, Y199 у p55γ) рецепторными и нерецепторными тирозинкиназами, что критически важно для регуляции активности PI3K и белок-белковых взаимодействий. Дополнительные модификации включают ацетилирование и убиквитинирование.
• Изоформа 2 PIK3R1 (p55α) высоко экспрессируется в скелетных мышцах и мозге, с более низкими уровнями в почках и сердечной мышце. На уровне белка как изоформа 2, так и изоформа 4 (p50α) обнаруживаются в скелетных мышцах, что предполагает тканеспецифические роли в передаче сигналов инсулина и метаболизме.
• Мутации в PIK3R1 связаны с синдромом SHORT (низкорослость, гиперрастяжимость, западение глаз, аномалия Ригера и задержка прорезывания зубов) и другими нарушениями роста, что подчеркивает его роль в развитии и передаче сигналов инсулиноподобного фактора роста.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфопептид, охватывающий Y467 человеческого p85α. Убедитесь, что ваша экспериментальная система сохраняет фосфорилирование — используйте ингибиторы фосфатаз при подготовке образцов и рассмотрите условия стимуляции (например, инсулином, факторами роста) для улучшения обнаружения фосфо-эпитопа.
• Это антитело валидировано для внутриклеточной проточной цитометрии (FC). Для оптимального окрашивания фиксируйте и пермеабилизируйте клетки, используя протоколы, совместимые с фосфо-специфическим обнаружением (например, фиксация формальдегидом с последующей пермеабилизацией метанолом). Титруйте антитело, чтобы определить оптимальное разведение для вашего типа клеток и условий обработки.
• Поскольку антитело распознает фосфо-Y467 p85α, фосфо-Y464 p85β и фосфо-Y199 p55γ, наблюдаемый диапазон молекулярной массы может варьироваться. При вестерн-блоттинге (если он проводится) полосы могут появляться в диапазоне 42-54 кДа (для более коротких изоформ) и 81-84 кДа (для полноразмерных p85α/p85β). Используйте соответствующие положительные контроли (например, стимулированные инсулином клетки HepG2 или HeLa) и проверяйте специфичность с помощью обработки фосфатазой.
• Рассмотрите возможность использования этого антитела в сочетании с антителами к общей регуляторной субъединице PI3K для оценки соотношения фосфорилирования в исследованиях передачи сигналов. Для количественной FC убедитесь, что флуорофор совместим с конфигурацией вашего цитометра и что включены контроли компенсации при мультиплексировании.
• Перекрестная реактивность заявлена для человека. При работе с другими видами перед использованием проверьте консервативность целевых фосфо-сайтов с помощью выравнивания последовательностей.

CamelBio: Ваш универсальный мост для закупок

CamelBio специализируется на предоставлении производителям диагностических средств, лабораториям и научно-исследовательским институтам доступа «в одном окне» к сырью для IVD, техническим услугам и консалтингу — от концепции до клиники. Это антитело к фосфо-регуляторной субъединице PI3K поддерживает исследования сигнальных путей PI3K/AKT, часто вовлеченных в развитие рака, метаболических расстройств и иммунологию. Благодаря нашей интегрированной сети поставок мы можем найти валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела, вспомогательные реагенты в больших объемах и даже сырье для редких мишеней, чтобы ускорить разработку и производство ваших анализов.