Фосфо-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 Кроличье поликлональное антитело для Вестерн-блоттинга (WB), иммунофлуоресценции/иммуноцитохимии (IF/ICC), иммуногистохимии на парафиновых срезах (IHC-P), ELISA - Q15796 / P84022

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация SMAD2 и SMAD3

• SMAD2 является рецептор-регулируемым SMAD (R-SMAD), который действует как внутриклеточный сигнальный трансдьюсер для путей TGF-бета и активина.
• При связывании лиганда киназы рецепторов 1 типа фосфорилируют SMAD2 по C-концевому мотиву SSXS (Ser465 и Ser467), что запускает его активацию, образование комплекса с SMAD4 и транслокацию в ядро.
• В ядре комплекс SMAD2/SMAD4 связывается с TGF-бета-чувствительным элементом (TRE) в промоторах генов-мишеней и регулирует транскрипцию.
• SMAD2 может функционировать как супрессор опухолей при колоректальной карциноме. Связанные ссылки: PMID:8752209
• Высоко экспрессируется в скелетных мышцах, эндотелиальных клетках, сердце и плаценте.
• SMAD3 является близким гомологом SMAD2 и имеет схожие механизмы активации. Антитело детектирует фосфорилирование по соответствующим сайтам Ser423/425 в SMAD3.
• Ключевые посттрансляционные модификации включают фосфорилирование, ацетилирование и убиквитинирование; SMAD2 также содержит сайт связывания цинка.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфопептид, нацеленный на двойной фосфорилированный мотив, что обеспечивает специфичность к активированным формам SMAD2 и SMAD3. Проверяйте фосфоспецифичность с использованием образцов, обработанных фосфатазой.
• Для вестерн-блоттинга включайте ингибиторы фосфатаз в лизирующий буфер для сохранения фосфорилирования и, по возможности, используйте свежие образцы. Предсказанная молекулярная масса SMAD2 и SMAD3 составляет около 48-52 кДа, но могут появляться дополнительные полосы из-за фосфорилирования и изоформ.
• Для иммунофлуоресценции и иммуногистохимии может подойти стандартная фиксация 4% PFA и пермеабилизация Triton X-100; для IHC-P оптимизируйте процедуру демаскировки антигена.
• ELISA может быть использован для высокопроизводительного скрининга активации пути TGF-бета; для исследований на нескольких видах рекомендуется тестирование перекрестной реактивности.
• Всегда включайте соответствующие положительные и отрицательные контроли (например, клетки, обработанные TGF-бета, против необработанных) для подтверждения фосфоспецифичности.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio поддерживает производителей диагностических систем и исследовательские лаборатории, предоставляя широкий спектр сырья для ИХД. Для исследований сигнального пути TGF-бета и онкологии мы предлагаем валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, а также вспомогательные реагенты в больших объемах. Наша команда оптимизирует процесс поиска сырья для редких мишеней, помогая вам ускорить разработку аналитических систем от концепции до клиники.