Кроличья поликлональная антитело к фосфо-POLR2A CTD-T4 для Вестерн-блоттинга, ИП, ИФА, ChIP - P24928

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация POLR2A

• POLR2A кодирует самую большую субъединицу РНК-полимеразы II (Pol II), белок размером ~217 кДа, который служит каталитическим ядром для синтеза РНК, зависимого от ДНК, и необходим для производства матричной РНК и некодирующей РНК. Связанные ссылки: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• C-концевой домен (CTD) POLR2A состоит из 52 тандемных гептапептидных повторов (YSPTSPS), которые подвергаются динамическому фосфорилированию, в основном по Ser2 и Ser5, для регуляции инициации, элонгации и терминации транскрипции, а также сопутствующей процессинга РНК. Связанные ссылки: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A содержит мотив DxDGD, который координирует ионы Mg2+, необходимые для добавления нуклеотидов, а также обладает 3'-5' экзонуклеазной активностью для коррекции (proofreading), обеспечивая высокую точность транскрипции. Связанные ссылки: PMID:8381534, PMID:9852112
• В основном локализуется в ядре и на хромосомах, POLR2A также был обнаружен в цитоплазме, что отражает его динамическое перемещение и многогранные роли.
• Посттрансляционные модификации, включая фосфорилирование серина/треонина, ацетилирование лизина, метилирование и убиквитинирование, модулируют активность и стабильность Pol II.
• Альтернативный сплайсинг генерирует множество изоформ, а мутации в POLR2A связаны с нейроразвивающими расстройствами, что подчеркивает его клиническую значимость.
• Также функционирует как РНК-зависимая РНК-полимераза, удлиняя некодирующие РНК, и выступает в качестве репликазы для вируса гепатита дельта во время инфекции.

Экспериментальное руководство и технические советы

• Поскольку иммуноген представляет собой фосфоспецифический пептид, соответствующий T4 повторов CTD POLR2A, проверьте специфичность антитела, используя конкуренцию нефосфорилированным пептидом или лизаты клеток, обработанные фосфатазой, для подтверждения зависимости от фосфорилирования.
• Для Вестерн-блоттинга (WB), из-за большого размера белка (~217 кДа), рассмотрите возможность использования гелей SDS-PAGE с низким процентом (например, 6-8%) и увеличенного времени переноса для обеспечения эффективного переноса полноформатного POLR2A.
• Для применения ChIP может потребоваться оптимизация условий сшивки и фрагментации хроматина; протестируйте различные методы фрагментации (например, ультразвуковую обработку или ферментативное переваривание) для получения фрагментов хроматина размером 200–500 п.н.
• В экспериментах с иммунопреципитацией (IP) и ИФА включите соответствующие положительные и отрицательные контроли, такие как лизаты из клеточных линий с известной экспрессией POLR2A (например, HeLa, HEK293) и мутанты с дефектом фосфорилирования, если они доступны.

CamelBio: Ваш мост для закупок полного цикла

CamelBio оптимизирует закупки сырья для IVD, предоставляя единый доступ к высококачественным антителам и вспомогательным реагентам, включая это фосфо-антитело к POLR2A для исследований транскрипции и хроматина. Наш обширный портфель охватывает валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, реагенты оптом и поиск редких мишеней — обеспечивая производителей диагностических средств и исследовательские лаборатории от концепции до клиники. Сотрудничайте с CamelBio для получения надежных, масштабируемых решений по поставкам, адаптированных к вашему конвейеру разработок.