Фосфо-специфическое кроличье моноклональное антитело к eIF4EBP1 (S65) для ВБ, ИФА — Q13541

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (связывающий белок 1 фактора инициации эукариотической трансляции 4E), также известный как PHAS-I, выполняет роль ключевого репрессора кеп-зависимой инициации трансляции за счет связывания с фактором инициации эукариот 4E (eIF4E).
• В состоянии низкой фосфорилизации eIF4EBP1 конкурирует с eIF4G (eIF4G1 и eIF4G3) за связывание с eIF4E, что предотвращает сборку комплекса eIF4F и ингибирует инициацию трансляции.
• Гиперфосфорилизация eIF4EBP1, часто опосредуемая путем mTORC1, вызывает его диссоциацию от eIF4E, что позволяет образоваться комплексу eIF4F и активирует трансляцию.
• eIF4EBP1 интегрирует сигналы от гормонов, факторов роста и питательных веществ через сигнальные пути MAP киназы и mTOR для контроля синтеза белка и роста клеток.
• Это фосфопротеин с множественными сайтами фосфорилирования, включая Ser65, которые модулируют его аффинность к eIF4E и способность регулировать трансляцию.
• Субклеточная локализация eIF4EBP1 — как цитоплазма, так и ядро, что соответствует его роли в контроле трансляции и возможному ядерно-цитоплазматическому шаттлу.
• Помимо фосфорилирования, белок подвергается посттрансляционным модификациям ацетилированием и убиквитин-подобной конъюгацией (Ubl), что указывает на сложные механизмы регуляции.

Рекомендации по проведению экспериментов и технические советы

• Поскольку данное антитело распознает конкретный сайт фосфорилирования (Ser65), подтверждайте специфичность детекции обработкой лизата клеток лямбда-фосфатазой или сравнением сигналов дикого типа с сигналами фосфо-дефицитных мутантов.
• Для вестерн-блота используйте стандартные протоколы, но обязательно добавьте в лизисный буфер ингибиторы фосфатаз для сохранения состояния фосфорилирования. Блокирующий агент вроде БСА позволяет снизить неспецифическое связывание, характерное для фосфо-специфических антител.
• В ИФА в качестве положительного контроля можно использовать иммобилизацию пептидного иммуногена, а для подтверждения фосфо-специфичности добавьте контроль с нефосфорилированным пептидом.
• Активация mTORC1 (например, инсулином или стимуляцией сывороткой) увеличивает фосфорилирование Ser65, а ингибирование (например, рапамицином) снижает его; добавляйте в эксперименты соответствующие стимулирующие или ингибирующие контроли.

CamelBio: ваш универсальный посредник по закупкам реагентов

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем и исследовательским группам широкий выбор сырья для ИВД, включая валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, а также вспомогательные реагенты в больших объемах. Для проектов, посвященных eIF4EBP1 и регуляции трансляции, мы предлагаем фосфо-специфические инструменты детекции и можем организовать поставку редких или заказных материалов под ваши задачи разработки. Сотрудничайте с нами, чтобы преодолеть разрыв между концепцией и клиникой с помощью надежных, высококачественных реагентов.