Моноклональное антитело кролика PE к фосфо-Zap70-Y319+Syk-Y352 человека/мыши для внутриклеточной проточной цитометрии — P43403

Основные спецификации и параметры продукта

Биологическая справка: функция и локализация ZAP70

• ZAP70 — это тирозинкиназа с молекулярной массой 70 кДа, необходимая для адаптивного иммунитета. Она играет центральную роль в сигнализации через Т-клеточный рецептор (TCR), фосфорилируя адаптерные белки LAT и LCP2 после активации.
• После связывания TCR ZAP70 рекрутируется к фосфорилированным мотивам ITAM CD3E и CD247/CD3Z на плазматической мембране. Этот процесс снимает аутоингибирование фермента и требует фосфорилирования, опосредованного LCK (PubMed:7509083).
  Связанные публикации: PMID:7509083
• ZAP70 дополнительно регулирует динамику активации Т-клеток, контролируя реорганизацию цитоскелета, адгезию и подвижность, обеспечивая правильную доставку эффекторных сигналов антигенпрезентирующим клеткам.
• Также он участвует в даунрегуляции TCR, опосредуя интернализацию и деградацию CD247/CD3Z через взаимодействие с убиквитин-лигазой CBL и адаптерами SLA/SLA2, таким образом модулируя терминацию сигнала.
• ZAP70 экспрессируется в Т-клетках, естественных киллерах, ранних тимоцитах и про/пре-В-клетках, и участвует в развитии и активации как Т-, так и В-клеток.
• Белок содержит два SH2-домена, которые специфично связывают фосфорилированные ITAM, а также АТФ-связывающий киназный домен. Он подвергается посттрансляционным модификациям, включая фосфорилирование, ацетилирование и убиквитинирование, что отмечается ключевыми словами UniProt: «Фосфопротеин», «Конъюгация Ubl», «Изопептидная связь» и «Ацетилирование».
• Альтернативный сплайсинг приводит к образованию нескольких изоформ ZAP70, а ассоциированные с заболеваниями варианты связаны с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (ТКИД) из-за нарушения сигнализации через TCR.
• Сайт иммуногена (Y319) — это ключевой регуляторный сайт фосфорилирования в области междомена B, высоко консервативный у человека и мыши. Его фосфорилирование критически важно для активации ZAP70; антитело также может проявлять перекрестную реактивность с Syk по его аналогичному сайту Y352 из-за гомологии последовательности в активационной петле.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Из-за фосфоспецифичности этого антитела необходимо добавлять ингибиторы фосфатаз во все буферы для лизиса, фиксации и окрашивания, чтобы сохранить уровень фосфорилирования во время обработки образца.
• Валидируйте специфичность антитела путем сравнения сигналов в стимулированных и нестимулированных клетках или обработкой образцов лямбда-фосфатазой перед окрашиванием.
• Антитело валидировано для внутриклеточной проточной цитометрии (ПЦ внутр); для получения лучших результатов обеспечьте оптимизированные протоколы фиксации и пермеабилизации (например, с использованием метанола или пермеабилизации на основе сапонина).
• Для исследований сигналинга Т-клеток рекомендуется использовать известные положительные контроли, такие как клетки Jurkat, стимулированные анти-CD3/CD28, или первичные мононуклеарные клетки периферической крови человека, а также отрицательные контроли — покоящиеся Т-клетки или В-клетки, дефицитные по Syk, при оценке перекрестной реактивности.

CamelBio: ваш единый центр по поиску реактивов

CamelBio выступает как интегрированный единый центр по поиску сырья для ИВД, покрывая все этапы от концепции до клинических испытаний. Для исследований сигналинга киназ ZAP70 и Syk мы предлагаем обширный портфель валидированных фосфоспецифических антител и антител к общему белку, рекомбинантных антигенов, больших объемов вспомогательных реактивов и доступ к редкому сырью для целей. Сотрудничайте с нами, чтобы оптимизировать разработку ваших диагностических продуктов за счет надежных высококачественных компонентов для иммуноанализа и технической поддержки.