Кроличье поликлональное антитело к MonoMethyl-Histone H4-R3 | P62805 | Вестерн-блоттинг, ИГХ-П, ИФ/ИЦХ, ELISA

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация гистона H4

Гистон H4 является основным компонентом нуклеосомы, вокруг которой обернуто примерно 147 пар оснований геномной ДНК. Будучи частью гистонового октамера, он играет ключевую роль в регуляции транскрипции, репликации и репарации ДНК, а также в поддержании хромосомной стабильности. Динамические посттрансляционные модификации гистонов, в совокупности называемые "гистоновым кодом", управляют структурой хроматина и экспрессией генов. Связанные ссылки: UniProt P62805

Гистон H4 преимущественно локализуется в ядре и ассоциирован с хромосомами на протяжении всего клеточного цикла. Ацетилированный H4 был специфически обнаружен в ядрах сперматид 11-й стадии, что указывает на его роль в компактизации хроматина в процессе сперматогенеза. Связанные ссылки: UniProt P62805

N-концевой хвост гистона H4 подвергается множественным посттрансляционным модификациям, включая ацетилирование, метилирование, фосфорилирование, цитруллинирование и различные ацилирования. Аргинин 3 (R3; соответствует R4 в зрелом белке после удаления инициаторного метионина) является ключевым остатком, который может быть монометилирован, асимметрично диметилирован (ферментом PRMT1), симметрично диметилирован (ферментами PRMT5/PRMT7) или превращен в цитруллин. Данное антитело специфично распознает монометилированную форму гистона H4 по аргинину 3. Связанные ссылки: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: Антитело было получено против синтетического монометилированного пептида, соответствующего аргинину 3 гистона H4 человека (NP_003529.1). При оценке специфичности рекомендуется использовать конкурентные анализы с пептидами или дот-блоттинг с дифференциально модифицированными пептидами для подтверждения селективного распознавания монометилирования в отличие от немодифицированного или диметилированного аргинина 3.
• Вестерн-блоттинг (WB): Предсказанная молекулярная масса гистона H4 составляет ~11 кДа; для оптимального разрешения рекомендуется использовать гели для SDS-PAGE с высоким процентом акриламида (15% или градиентные). Ядерные экстракты или гистоны, экстрагированные кислотой, обычно дают более сильный сигнал. Из-за малого размера белка проверяйте эффективность переноса и используйте подходящие мембраны (например, PVDF 0,2 мкм).
• Иммуногистохимия (IHC-P) и иммуноцитохимия/иммунофлуоресценция (IF/ICC): Ожидается преимущественно ядерное окрашивание. Следует оптимизировать процедуру демаскировки антигена (например, цитратным буфером, pH 6,0) для парафиновых срезов и пермеабилизацию детергентом для клеток. Перекрестная реактивность антитела с тканями мыши и крысы делает его пригодным для изучения гистоновых модификаций в различных модельных системах.
• ELISA: Монометилированный пептид можно использовать в качестве иммобилизованного антигена для прямого или конкурентного ELISA с целью количественного определения аффинности связывания и специфичности антитела. Коэффициенты разведения следует титровать в зависимости от формата анализа.
• Перекрестная реактивность между видами: Сообщается, что антитело распознает гистон H4 человека, мыши и крысы; предполагается реактивность с широким кругом других видов из-за чрезвычайно высокой консервативности последовательности гистона H4. Для непроверенных видов рекомендуется проверять гомологию последовательности пептида в области иммуногена.
• Особенности поликлональных антител: Будучи поликлональным антителом кролика, оно может демонстрировать партионные различия в титре и фоновом сигнале. Включайте соответствующие положительные и отрицательные контроли и повторно валидируйте каждую новую партию в ваших экспериментальных условиях.

CamelBio: Ваш универсальный мост для поставок

CamelBio служит комплексным, универсальным мостом для поставок сырья для in vitro диагностики, соединяя производителей диагностических систем и исследовательские лаборатории с высококачественными, тщательно охарактеризованными реагентами. Мы предлагаем кроличье поликлональное антитело к MonoMethyl-Histone H4-R3 наряду с широким портфелем валидированных пар антител, оптимизированных моноклональных/поликлональных антител, вспомогательных реагентов оптом и возможностью индивидуального поиска редких эпигенетических мишеней. Независимо от того, разрабатываете ли вы анализы для биомаркеров или масштабируете производство, интегрированная цепочка поставок CamelBio и экспертное консультирование поддерживают каждый этап — от концепции до клиники.