Кроличье поликлональное антитело к MonoMethyl-Histone H4-K5 (P62805) для IF/ICC и ELISA

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация гистона H4

• Функция: Гистон H4 является основным компонентом нуклеосомы, упаковывая и уплотняя ДНК в хроматин. Это ограничивает доступность ДНК и играет центральную роль в регуляции транскрипции, репарации ДНК, репликации ДНК и хромосомной стабильности. Нуклеосомы состоят из двух копий каждого из гистонов H2A, H2B, H3 и H4, образуя октамер, вокруг которого обернуто 147 пар оснований ДНК. Гистоновый код, опосредованный посттрансляционными модификациями, регулирует доступность ДНК и ремоделирование нуклеосом. Связанные ссылки: UniProtKB P62805

• Субклеточная локализация: Гистон H4 в основном локализован в ядре и ассоциирован с хромосомами. Ацетилирование может влиять на его субъядерное распределение; например, ацетилированный H4 локализуется в ядре в сперматидах стадии 11. Связанные ссылки: UniProtKB P62805

• Посттрансляционные модификации: Гистон H4 подвергается обширным посттрансляционным модификациям, особенно на его N-концевом хвосте. Ацетилирование происходит по нескольким лизинам (например, K6, K9, K13, K17, K32, K92; см. PMID:19608861). Метилирование обнаружено по аргинину 4 (асимметричное диметиллирование PRMT1; PMID:11387442) и лизину 21 (монометиллирование; PMID:12086618). Монометиллирование по лизину 5 (K5me1) является специфической эпигенетической меткой, распознаваемой различными белками-читателями и участвующей в регуляции транскрипции. Другие модификации включают фосфорилирование, цитруллинирование и убиквитинирование, вместе формируя сложный регуляторный код. Связанные ссылки: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: Это антитело получено против синтетического пептида, соответствующего N-концевой области гистона H4 человека, монометилированного по K5. При разработке аналогичных антител убедитесь, что пептид обладает высокой чистотой, а модификация подтверждена масс-спектрометрией. Рассмотрите возможность использования неметилированного пептида в качестве отрицательного контроля в ваших анализах для проверки специфичности.
• IF/ICC: Для иммунофлуоресценции обычно подходит стандартная фиксация 4% параформальдегидом и пермеабилизация 0,1-0,5% Triton X-100. Блокируйте неспецифическое связывание 5% BSA или сывороткой. Доступность эпитопа может варьироваться; можно рассмотреть оптимизацию демаскировки антигена. Поскольку гистоны являются ядерными белками, ожидайте ядерного окрашивания. Включайте контроль без первичного антитела для оценки фона.
• ELISA: Для иммобилизации разбавляйте антитело или антиген в карбонатном/бикарбонатном буфере (pH 9,6). Титруйте концентрацию антитела для определения оптимального соотношения сигнал/шум. Используйте монометилированный пептид в качестве положительного контроля и немодифицированный пептид в качестве отрицательного контроля для подтверждения специфичности.
• Общие рекомендации: Как и для любого антитела, специфичного к модификации, возможны различия между партиями; валидируйте новые партии в вашей конкретной экспериментальной системе. Перекрестная реактивность предсказана для человека, мыши и крысы на основе консервативности последовательности; тестируйте на интересующем вас виде.

CamelBio: Ваш мост для комплексных поставок

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем, лабораториям и исследовательским институтам комплексный доступ к высококачественным сырьевым материалам для ИВД. Наш портфель включает валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, такие как это кроличье pAb против MonoMethyl-Histone H4-K5, а также вспомогательные реагенты оптом. Для редких или пользовательских мишеней мы предлагаем специализированный поиск и техническую поддержку, чтобы упростить разработку ваших аналитических систем от концепции до клиники.