МоноМетил-Гистон H3-K9 кроличий mAb | Q16695 / P68431 – Специфический к метилированию антитело для WB, ChIP, ELISA и др.

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация гистона H3

Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы, фундаментальной повторяющейся единицы хроматина. Он играет центральную роль в компактизации ДНК и регуляции ее доступности для транскрипции, репликации и репаративных механизмов.

Ключевой особенностью биологии гистона H3 является гипотеза «гистонового кода» — специфические комбинации посттрансляционных модификаций (PTM) на его гибком N-концевом хвосте управляют различными состояниями хроматина и последующими ядерными процессами. Среди этих PTM метилирование по лизину 9 (H3K9me) является одной из наиболее изученных меток, часто связанной с транскрипционной репрессией, формированием гетерохроматина и геномной стабильностью.

Связанные ссылки: PMID:11242053 PMID:16267050 PMID:17194708

Лизин в позиции 9 зрелого белка H3 (соответствует позиции 10 UniProt) может находиться в различных состояниях метилирования — моно-, ди- или три-метилированном — каждое из которых имеет различные биологические последствия. Монометилированный H3K9 (H3K9me1) в основном обогащен на промоторах и энхансерах активных генов в эухроматиновых областях, где он точно настраивает транскрипционную активность, хотя он также был обнаружен в перицентрическом гетерохроматине в определенных клеточных контекстах.

Связанные ссылки: PMID:16185088 PMID:16457588

Гистон H3 существует в виде нескольких вариантов, кодируемых разными генами. Канонический H3.1 (SWISS P68431) экспрессируется зависимым от репликации образом и встраивается в хроматин во время S-фазы, в то время как тестикулярно-специфичный вариант H3.1t/H3-4 (Q16695) экспрессируется исключительно в тестикулярных клетках и может способствовать специфичной для сперматогенеза динамике хроматина. Эпитоп этого антитела охватывает область, высококонсервативную среди вариантов H3, обеспечивая широкое обнаружение.

Связанные ссылки: Нет (тканевая специфичность на основе записей последовательностей)

На субклеточном уровне гистон H3 локализован в ядре и тесно связан с хромосомной ДНК.

Это антитело специфически распознает монометилированную форму H3K9. В силу консервативности сайта модификации прогнозируется его реакция с несколькими видами и подтипами H3.

Экспериментальное руководство и технические советы

• Подготовка образца для WB: Рассмотрите возможность использования экстрагированных кислотой гистонов или обогащенных ядром лизатов для улучшения соотношения сигнал/шум. Для общих клеточных лизатов включайте соответствующие коктейли ингибиторов протеаз и избегайте условий денатурации, которые могут привести к потере модификаций гистонов.
• Проверка специфичности: В любом анализе подтвердите специфичность антитела, используя синтетические монометилированные и неметилированные пептиды K9 в эксперименте по конкуренции пептидов (dot blot или ELISA). Рекомбинантный массив белков гистона H3 с определенными состояниями метилирования также может служить строгим контролем.
• Оптимизация ChIP: Для иммунопреципитации хроматина время сшивания, количество антитела и условия соникации должны быть определены эмпирически. Высокое авидность антитела к монометильной метке может потребовать меньшего количества антитела на реакцию по сравнению с пан-антителами к H3. Всегда включайте контроль блокировки монометил-специфичным пептидом.
• Соображения по IHC и IF: Фиксация и демаскировка антигена могут влиять на доступность эпитопа. Для IHC-P стандартные протоколы с парафиновыми срезами, фиксированными формалином (FFPE), с этапом демаскировки антигена с нагреванием (цитратный буфер, pH 6.0) часто работают хорошо; однако рекомендуется предварительное тестирование. В иммунофлуоресценции краткая пермеабилизация метанолом может усилить ядерное окрашивание.
• Применения ELISA/dot blot: К coats plates with monomethylated H3(1‑21) peptide or full‑length recombinant H3K9me1 to evaluate binding affinity and linearity. Use BSA‑conjugated peptide as an alternative.
• Перекрестная реактивность видов: Хотя прогнозируется широкая реактивность, мы рекомендуем валидировать антитело в вашей конкретной системе образцов (например, мышь, крыса или другие соответствующие виды) перед масштабными экспериментами.

CamelBio: Ваш мост для снабжения полного цикла

CamelBio выступает в качестве комплексного партнера по IVD сырью, связывая производителей диагностических средств, исследовательские лаборатории и институты от концепции до клиники. Разрабатываете ли вы эпигенетические тесты на основе модификаций гистонов или создаете иммуноанализы, специфичные к метилированию, CamelBio может предоставить валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела, вспомогательные реактивы в больших объемах и даже помочь в поиске сырья для редких мишеней. Наш портфель продуктов включает это высокоаффинное монометил-гистон H3-K9 кроличье моноклональное антитело, разработанное для поддержки ваших эпигенетических исследований и диагностических потребностей с надежной стабильностью от партии к партии.