[Валидировано на KO] Кроличий моноклональный антитело против Caspase-8 для WB, ELISA - Q14790

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация Caspase-8

• Caspase-8 (также обозначаемый как FLICE, MACH, MCH5) — это инициирующая каспаза семейства цистеиновых аспартатных протеаз с молекулярной массой 55 кДа, которая производится в нескольких изоформах в результате альтернативного сплайсинга; полная изоформа 1 обладает каталитической активностью, тогда как более короткие изоформы могут действовать как доминантно-негативные ингибиторы.
• Являясь ключевым инициатором внешнего пути апоптоза, Caspase-8 рекрутируется через адаптерный белок FADD в комплексы рецепторов смерти (DISC) при стимуляции FAS или TNFRSF1A, что приводит к его димеризации, аутокаталитическому расщеплению и последующей активации нижестоящих эффекторных каспаз (CASP3/7) и BID для выполнения клеточной смерти. Связанные ссылки: PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• Помимо апоптоза, Caspase-8 отрицательно регулирует некроптоз, расщепляя RIPK1 по Asp-324, что ингибирует киназную активность RIPK1 и предотвращает некроптотический и воспалительный сигналинг, индуцированный TNF. Связанные ссылки: PMID:31827280, PMID:31827281
• Caspase-8 также опосредует пироптоз, расщепляя и активируя газдермин-C (GSDMC) и газдермин-D (GSDMD), высвобождая их N-концевые порообразующие домены, которые вызывают разрыв мембраны и воспалительную гибель клетки. Связанные ссылки: PMID:32929201, PMID:34012073
• Он локализуется преимущественно в цитоплазме, но может быть обнаружен в ядре и на ламеллиподиях; фосфорилирование по Tyr-380, независимо от его протеолитической активности, способствует миграции клеток. Связанные ссылки: PMID:18216014, PMID:27109099
• Caspase-8 широко экспрессируется, с наивысшим уровнем мРНК в лейкоцитах периферической крови, селезенке, вилочковой железе и печени, и очень низкой экспрессией в мозге, яичках и скелетных мышцах.
• Кроме того, Caspase-8 расщепляет PARP1 и PARP2 во время апоптоза и может участвовать в путях цитотоксической клеточной смерти, опосредованной грамзимом B. Связанные ссылки: PMID:8681376, PMID:8755496

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует остаткам 200-300 в пределах каталитического домена человеческого Caspase-8; этот регион присутствует в полном длину проферменте и большом каталитическом субъединице, поэтому антитело может обнаруживать как необработанные, так и расщепленные формы.
• Для вестерн-блоттинга проводите SDS-PAGE в восстанавливающих условиях; ожидайте основную полосу на уровне ~55 кДа (полная длина) и, в зависимости от обработки клеток, меньшие полосы, представляющие активные фрагменты p18/p10. Всегда включайте маркеры молекулярного веса.
• Это антитело, как сообщается, валидировано на KO; рассмотрите возможность использования лизатов клеток с нокаутом Caspase-8 в качестве отрицательного контроля для подтверждения специфичности полосы в вашей экспериментальной системе.
• Для применения в ИФА (ELISA) выполните титрацию методом шахматной доски для установления оптимальных концентраций покрытия антигена и антитела; провалидуйте с использованием известного стандарта, если он доступен.
• При изучении активации Caspase-8 обрабатывайте клетки соответствующими индукторами (например, TNF-α + циклогексимид для апоптоза или TNF-α + zVAD + миметик Smac для некроптоза) и контролируйте кинетику расщепления, чтобы различать модальности гибели клеток.
• Перекрестная реактивность сообщается только для человека; при применении к другим видам выровняйте последовательность иммуногенного пептида с Caspase-8 целевого организма для оценки потенциальной реактивности.

CamelBio: Ваш мост для комплексного снабжения

CamelBio специализируется на предоставлении производителям диагностических средств, лабораториям и исследовательским институтам полного спектра сырья для IVD и технической поддержки. Это моноклональное антитело против Caspase-8 является примером нашего обязательства предоставлять валидированные инструменты для исследований апоптоза и клеточной смерти. Помимо отдельных антител, мы предлагаем комплексный доступ к оптимизированным парам антител, вспомогательным реагентам в больших объемах и поиску редких мишеней — помогая вам бесшовно преодолеть путь от концепции к клиническому применению.