Кроличье моноклональное антитело к ESRα для Вестерн-блоттинга - P03372

Основные спецификации и параметры продукта

Биологическая справка: Функция и локализация рецептора эстрогена

• Рецептор эстрогена альфа (ERα), также известный как ER-альфа, рецептор эстрадиола и ядерный рецептор подсемейства 3 группы A член 1 (NR3A1), кодируется геном ESR1 и принадлежит к суперсемейству ядерных гормональных рецепторов.
• Альтернативный сплайсинг генерирует множество изоформ, некоторые из которых лишены функциональных доменов и могут модулировать транскрипционную активность полноразмерного рецептора посредством конкурентного связывания лиганда или ДНК и гетеродимеризации. Связанные ссылки: PMID:10970861
• При связывании 17β-эстрадиола ERα претерпевает конформационные изменения, которые способствуют гомодимеризации и прямому связыванию с эстроген-чувствительными элементами (ERE) в промоторах генов-мишеней или ассоциации с другими факторами транскрипции (например, AP-1, Sp1, NF-κB) для регуляции транскрипции, не зависящей от ERE.
• ERα также опосредует быструю мембрано-инициированную эстрогеновую сигнализацию, активируя различные киназные каскады, и необходим для MTA1-опосредованной транскрипционной регуляции BRCA1 и BCAS3. Связанные ссылки: PMID:17922032
• Участвует в активации NOS3 и продукции эндотелиального оксида азота, способствуя сосудистому гомеостазу. Связанные ссылки: PMID:21937726
• Преимущественно локализуется в ядре, но также обнаруживается в цитоплазме, клеточной мембране и аппарате Гольджи; его внутриклеточное распределение динамически регулируется связыванием лиганда и посттрансляционными модификациями.
• Посттрансляционные модификации включают фосфорилирование, пальмитоилирование, метилирование, убиквитинирование и гликозилирование, которые влияют на стабильность рецептора, его локализацию и транскрипционную активность.
• Широко экспрессируется во многих тканях, но заметно отсутствует в гипофизе. Связанные ссылки: PMID:10970861

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует остаткам 495–595 в C-концевой области человеческого ESRα. Эта область может присутствовать в нескольких изоформах, поэтому рекомендуется проверить специфичность к изоформе с использованием клеточных линий, экспрессирующих различные сплайс-варианты.
• Для Вестерн-блоттинга (WB) предсказанная молекулярная масса составляет 66 кДа; используйте прединкрубированные маркеры для подтверждения размера и оптимизируйте условия блокирования для снижения неспецифического связывания.
• При выполнении иммунопреципитации (IP) готовьте свежие лизаты с соответствующими ингибиторами протеаз и фосфатаз для поддержания стабильности ERα.
• Для хроматин-иммунопреципитации (ChIP) тщательно оптимизируйте параметры сшивания и ультразвуковой обработки, так как взаимодействия ERα с хроматином могут быть транзиторными и зависеть от стимуляции лигандом.
• При проточной цитометрии (внутриклеточное окрашивание) включайте контроль изотипа и валидируйте протоколы пермеабилизации, подходящие для ядерных антигенов.
• Для ELISA титруйте антитело в качестве захватывающего или детектирующего реагента против рекомбинантного белка ERα для установления оптимальных рабочих концентраций.
• Все применения были валидированы на человеческих образцах; реактивность с другими видами должна быть подтверждена экспериментально.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio поставляет комплексные сырьевые материалы для IVD, включая валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела, вспомогательные реагенты оптом и индивидуальный поиск редких мишеней. Для исследований рецептора эстрогена и связанной с ним разработки диагностических средств мы служим мостом от концепции до клиники, предоставляя надежные, высокопроизводительные реагенты, подкрепленные технической и регуляторной поддержкой.