Поликлональное кроличье антитело к диметилированному гистону H3-K79 (Q16695/P68431) – валидировано для WB, IHC-P, ChIP-seq

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация гистона H3

• Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы, он необходим для упаковки и компактизации ДНК в хроматин. Такая структурная организация регулирует доступность ДНК и играет центральную роль в процессах транскрипции, репарации ДНК, репликации и поддержания стабильности хромосом. Связанные источники: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Гистон H3 существует в нескольких вариантах. Канонический гистон H3.1 (кодируемый генами H3C1–H3C12) экспрессируется во всех тканях, тогда как тестикулярный вариант H3.1t (H3-4) экспрессируется преимущественно в клетках яичек. Оба варианта имеют высокую гомологию последовательности, включая консервативный остаток K79. Связанные источники: UniProt Q16695 (специфичность по тканям), UniProt P68431

• Посттрансляционные модификации (ПТМ) гистона H3, такие как метилирование, ацетилирование, фосфорилирование и другие, формируют "гистоновый код", который определяет динамику хроматина. Лизин 79 (K79) является известным сайтом метилирования (моно-, ди- и триметилирование), при этом диметилирование (H3K79me2) участвует в регуляции транскрипции, репарации ДНК и теломерного сайленсинга. Связанные источники: Для ознакомления с связанными модификациями смотрите PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Это антитело получено против синтетического пептида с диметилированным K79. Оно разработано для специфического детектирования диметилированного состояния гистона H3 по положению K79, благодаря консервативности последовательности прогнозируется широкая реактивность у многих видов. Связанные источники: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Субклеточная локализация: гистон H3 в основном находится в ядре и на хромосомах, где входит в состав ядерной части нуклеосомы. Связанные источники: UniProt Q16695, UniProt P68431

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: антитело получено с использованием синтетического пептида, содержащего диметилированный K79 гистона H3 человека (NP_003520.1). Для получения других антител, специфичных к модификациям, рекомендуется использовать синтетические пептиды с четко определенными модификациями для обеспечения высокой специфичности.
• Вестерн-блоттинг (WB): прогнозируемая молекулярная масса гистона H3 составляет ~15 кДа. Для получения лучших результатов используют гистоны, выделенные кислотной экстракцией, или лизаты цельных клеток; рекомендуется оптимизировать процент геля и условия переноса для белков низкой молекулярной массы. Обязательно проводите валидацию в вашей системе образцов.
• Иммуногистохимия (IHC-P) и иммунофлуоресценция (IF/ICC): может потребоваться демаскирование антигена (например, в цитратном буфере). Тестируйте несколько разведений антитела; учтите, что фиксация и заливка ткани могут влиять на доступность эпитопа.
• Хроматиновая иммунопреципитация (ChIP/ChIP-seq): это антитело подходит для применения в ChIP и ChIP-seq. Обеспечьте правильную сшивку (например, формальдегидом) и разрезание хроматина до фрагментов размером ~200–500 п.н. Включайте соответствующие положительные и отрицательные контролы на статус метилирования.
• ELISA и IP: можно использовать стандартные протоколы. Для IP преклининг и использование подходящих лизисных буферов (например, RIPA для выделения гистонов) позволяет улучшить отношение сигнал/шум.
• Перекрестная реактивность: антитело распознает гистон H3 человека, мыши и крысы, на основе гомологии последовательности прогнозируется реактивность с большим количеством дополнительных видов. Всегда проверяйте перекрестную реактивность для вашего целевого вида.
• Общие рекомендации: как и для любых поликлоных антител, учитывайте вариабельность между сериями и проводите повторную валидацию при смене серии. Храните в соответствии с рекомендациями (поставляется в сумке-холодильнике), избегайте многократных циклов замораживания-размораживания.

CamelBio: ваш единый центр поставки реагентов

CamelBio предоставляет производителям диагностикумов, лабораториям и научно-исследовательским институтам доступ к сырью для ИВД, техническим услугам и консультациям «под ключ» — мы поддерживаем все этапы разработки от идеи до клинических испытаний. Мы поставляем валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлоные антитела, вспомогательные реагенты большими партиями и организуем поиск редких сырьевых материалов для эпигенетических и хроматиновых исследований. Предлагая это кроличье поликлональное антитело к ДиМетил-гистону H3-K79, мы готовы поддержать разработку ваших диагностических и аналитических тестов надежными поставками и экспертными рекомендациями.