Поликлональное кроличье антитело к диметилгистону H3-K4 (Q16695/P68431) для WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация гистона H3.1t/гистона H3.1

Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы — фундаментальной повторяющейся единицы хроматина. Вместе с гистонами H2A, H2B и H4 он формирует октамер, вокруг которого оборачивается 147 пар оснований ДНК, что обеспечивает компактизацию генома и регулирует доступность ДНК для взаимодействия с клеточными факторами. Эта структура необходима для процессов, протекающих на матрице ДНК, включая транскрипцию, репликацию, репарацию и поддержание стабильности хромосом.

Канонический вариант гистона H3.1 кодируется несколькими генами (например, от HIST1H3A до HIST1H3J) и встраивается в новую реплицированную ДНК во время S-фазы клеточного цикла. В отличие от него, изоформа H3.1t (ген H3-4 / HIST3H3) является вариантой, специфичной для семенников, экспрессируется преимущественно в тестикулярных клетках и потенциально участвует в ремоделировании хроматина во время сперматогенеза.

На гистоне H3 происходит множество посттрансляционных модификаций (ПТМ) на его гибком N-концевом хвосте, формирующих сложный регуляторный «гистоновый код». Известные ПТМ включают метилирование, ацетилирование, фосфорилирование, АДФ-рибозилирование, убиквитинирование и другие. Метилирование лизина 4 (H3K4) является ключевой меткой: диметилирование (H3K4me2) ассоциируется с активными и подготовленными регуляторными элементами генома, такими как промоторы и энхансеры.

Данное антитело было получено против синтетического пептида, соответствующего N-концевому хвосту (аминокислоты 1-100) гистона H3 человека — региона, который включает остаток K4 и высоко консервативен у разных видов. Антитело специфически распознает диметилированную форму K4.

Гистон H3 локализуется в ядре и является структурным компонентом хромосом.

Связанные источники: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген охватывает N-концевой хвост гистона H3, что обеспечивает распознавание региона, содержащего остаток K4. Для метилспецифического детектирования проводите валидацию с использованием подходящих анализов блокировки пептидами или контролей на основе мутантного гистона.
• Для вестерн-блоттинга (WB) можно использовать экстракты, обогащенные гистонами, или полные клеточные лизаты. Ожидаемая полоса имеет размер примерно 15 кДа. Для снижения фона рекомендуется использовать высококачественную трансферную мембрану и увеличенное время блокировки.
• При иммунопреципитации хроматина (ChIP) и ChIP-seq данное антитело подходит для картирование распределения H3K4me2. Для оценки специфичности включите контрольные локусы: позитивные (например, активные промоторы) и негативные (например, межгенные области). При проведении ChIP-seq оптимизируйте подготовку библиотек и глубину секвенирования в соответствии с конкретным дизайном эксперимента.
• Для иммуногистохимии (IHC-P) и иммунофлуоресценции (IF/ICC) детекция может быть улучшена за счет демаскировки антигена (например, термическая обработка в цитратном буфере pH 6.0) и пермеабилизации. Протестируйте разные методы фиксации (например, формалин против метанола), так как они могут влиять на доступность эпитопа.
• Благодаря высокой консервативности последовательности N-конца H3 у антитела прогнозируется перекрестная реактивность с образцами человека, мыши, крысы и других видов. При работе с новым для вас видом рекомендуется выровнять последовательности для подтверждения консервативности эпитопа и провести эксперимент с позитивным контролем.
• Антитела, специфичные к метилированию, могут проявлять перекрестную реактивность с другими метил-лизиновыми метками. Для подтверждения специфичности проводите конкурентные эксперименты блокировки с использованием диметил-K4 и других модифицированных пептидов.
• Оптимальные разведения антитела для каждого анализа следует подбирать эмпирически.

CamelBio: ваш универсальный мост по поиску реагентов

CamelBio — ваш универсальный партнер по поставке сырья для IVD, предоставляющий надежный доступ к этому антителу против диметилгистона H3-K4 и широкому портфелю антител для эпигенетических исследований и разработки диагностики. От валидированных пар антител и оптимизированных поликлональных/моноклональных антител до массовых поставок вспомогательных реагентов и поиска сырья для редких мишеней — CamelBio поддерживает весь ваш процесс разработки от концепции до клинических испытаний. Свяжитесь с нашей командой, чтобы подобрать индивидуальные решения по поставкам для вашего следующего проекта.