APC-конъюгированное кроличье моноклональное антитело против мышиного TNF-α для внутриклеточного проточного цитометрического анализа (FC intra) - P06804

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация TNF-α

• Фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) — это провоспалительный цитокин, в основном секретируемый активированными макрофагами, принадлежащий к суперсемейству лигандов фактора некроза опухоли (TNFSF2). Также известен как кахектин и кодируется геном Tnf (альтернативные названия Tnfa, Tnfsf2).
• TNF-α оказывает свои биологические эффекты, связываясь с двумя различными рецепторами, TNFR1 (TNFRSF1A) и TNFR2 (TNFRSF1B), опосредуя широкий спектр клеточных ответов, включая апоптоз, выживание клеток и воспаление.
• Этот цитокин является ключевым медиатором острой фазы воспаления и может функционировать как эндогенный пироген, вызывая лихорадку напрямую или через стимуляцию секреции интерлейкина-1, а также участвует в развитии кахексии при хронических заболеваниях.
• В жировой ткани TNF-α индуцирует инсулинорезистентность, подавляя индуцированную инсулином тирозинфосфорилирование IRS1 и поглощение глюкозы, а также способствует деградации белка GKAP42, внося вклад в патогенез диабета 2 типа. Связанные ссылки: PMID:25586176
• TNF-α играет значительную роль в метаболизме костной ткани, способствуя остеокластогенезу и тем самым опосредуя резорбцию кости, что связывает воспаление с потерей костной массы при таких состояниях, как ревматоидный артрит. Связанные ссылки: PMID:32741026
• Внутриклеточный домен (ICD) TNF-α, образующийся в результате протеолитического расщепления, может действовать как сигнальная молекула, индуцируя продукцию IL-12 в дендритных клетках, что подчеркивает его рецептор-независимую функцию.
• На субклеточном уровне TNF-α синтезируется как трансмембранный белок типа II (26 кДа) на клеточной мембране и расщепляется конвертазой TNF-α (TACE) с высвобождением растворимого цитокина массой 17 кДа. Белок подвергается нескольким посттрансляционным модификациям, включая гликозилирование, фосфорилирование, миристоилирование и образование дисульфидных связей.
• Помимо своей цитотоксической и провоспалительной роли, TNF-α также синергично с IL-1β и IL-6 стимулирует ангиогенез, а при определенных условиях может способствовать пролиферации и дифференцировке клеток, отражая его плейотропную природу.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует аминокислотам 80-235 мышиного TNF-α (NP_038721.1), охватывая область зрелого растворимого TNF-α. Такая конструкция нацелена на внеклеточный домен и потенциально может распознавать как мембраносвязанную, так и растворимую формы.
• Для внутриклеточной проточной цитометрии критически важны протоколы фиксации и пермеабилизации. Рекомендуется использовать стандартный протокол внутриклеточного окрашивания с набором для фиксации/пермеабилизации, подходящим для цитокинов.
• Поскольку TNF-α является секретируемым белком, в покоящихся клетках его внутриклеточный уровень может быть низким. Для надежного детектирования стимулируйте клетки (например, PMA/иономицином или ЛПС) в присутствии ингибитора транспорта белков (например, Брефельдина А или Монензина) для накопления TNF-α в аппарате Гольджи.
• Рекомендуется титровать антитело для определения оптимальной концентрации для вашей конкретной экспериментальной системы, начиная с диапазона 0,5-5 мкг на миллион клеток.
• Используйте соответствующие контроли, включая нестимулированные клетки и антитела изотипического контроля, чтобы отличить специфическое окрашивание от фонового.
• Антитело конъюгировано с APC, ярким флуорофором, подходящим для мультицветных панелей проточной цитометрии. Обеспечьте правильную компенсацию при использовании с другими флуорофорами.

CamelBio: Ваш универсальный мост к поставщикам

CamelBio выступает в качестве комплексного партнера по поставкам сырья для ИХА, поддерживая производителей диагностических систем, лаборатории и исследовательские институты от концепции до клиники. Это APC-конъюгированное антитело против мышиного TNF-α хорошо подходит для разработки чувствительных анализов на основе проточной цитометрии и иммуноаналитических платформ, а CamelBio может помочь с оптовыми закупками, индивидуальными конъюгациями и поставками дополнительных реагентов. Благодаря надежному доступу к валидированным парам антител, оптимизированным моноклональным/поликлональным антителам и вспомогательным реагентам, CamelBio упрощает вашу цепочку поставок для исследований в области воспаления и иммунологии.