Поликлональное антитело против Smad4 для ВБ, IF/ICC, IHC-P, ИФА — Q13485

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация Smad4

• SMAD4 является общим медиатором (ко-SMAD) трансдукции сигнала суперсемейства TGF-β. Он образует гетеротримерный комплекс с регулруемыми рецепторами SMAD (например, SMAD2/3) в ядре, что необходимо для опосредованной TGF-β транскрипционной регуляции.
  Связанные источники:
  PMID:25514493
• Действует как транскрипционный коактиватор: SMAD4 облегчает связывание ДНК комплексом SMAD2/SMAD4/FAST-1 и обеспечивает активационный домен для транскрипции, опосредованной SMAD1 или SMAD2. Он также участвует в составе комплекса транскрипционного фактора AP-1 (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) для синергии ответов на TGF-β.
• Функционирует как опухолевый супрессор; потеря или инактивация SMAD4 — частое событие при протоковой аденокарциноме поджелудочной железы, колоректальном раке и других злокачественных новообразованиях, что подтверждает его роль в контроле роста клеток.
• В физиологии мышц SMAD4 действует как узловой переключатель: при рекрутировании миостатином (MSTN) он запускает атрофию через сигнализацию SMAD2/4; при высвобождении переключается на опосредованную BMP гипертрофию через SMAD1/5/8 (по аналогии).
• SMAD4 положительно регулирует киназную активность PDPK1, способствуя его диссоциации с ингибирующим белком 14-3-3 YWHAQ.
• Локализуется как в цитоплазме, так и в ядре; ядерная транслокация индуцируется при стимуляции TGF-β или BMP, где он накапливается в транскрипционно активных комплексах.
• Содержит N-концевой домен MH1 для связывания ДНК с SBE (5’-GTCT/AGAC-3’) и C-концевой домен MH2 для взаимодействия с рецептором, олигомеризации и транскрипционной активации. Белок подвергается ацетилированию, фосфорилированию и убиквитинированию.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует C-концевому домену MH2 (а.о. 320–552), который высоко консервативен у человека, мыши и крысы, что согласуется с заявленной перекрестной реактивностью. Для исследования новых видов рекомендуется провести выравнивание последовательностей.
• Для вестерн-блоттинга (ВБ) ожидается полоса с молекулярной массой примерно 60 кДа. Используйте подходящие контрольные загрузки и проводите валидацию на лизатах клеток, обработанных и необработанных TGF-β, для подтверждения специфичности.
• Для иммунофлуоресценции/иммуноцитохимии (IF/ICC) и иммуногистохимии (IHC-P) окрашивание ядра или цитоплазмы может варьироваться в зависимости от контекста сигнализации. Включите соответствующие негативные контроли (например, нокаутные клеточные линии или блокирующий пептид) для проверки специфичности сигнала.
• Для применения в ИФА оптимизируйте условия иммобилизации антигена и детекции. Антитело можно сочетать с моноклональными антителами к другим эпитопами для разработки систем сэндвич-ИФА для количественного определения SMAD4.
• Учитывая поликлональную природу антитела, в критических количественных анализах следует проверять консистентность результатов между сериями. Если воспроизводимость является основным требованием, рассмотрите использование рекомбинантных антител.

CamelBio: ваш универсальный мост по поставкам реагентов

CamelBio предоставляет исследователям и производителям диагностических систем надежный доступ к критическим реагентам сигнальных путей, таким как антитела против Smad4. От валидированных пар антител до крупных партий вспомогательных реагентов — наш портфель поддерживает разработку надежных анализатов для исследования пути TGF-β/BMP и исследований рака. Мы также предлагаем индивидуальные поставки для редких мишеней, обеспечивая беспрепятственный переход от концепции до клинических исследований.