Поликлональное антитело к 3CLpro SARS-CoV-2 для ВБ, ИФ/ИКК, ИФА — P0DTC2

Основные спецификации и параметры продукта

Биологическая справка: функция и локализация 3CLpro SARS-CoV-2

• Шиповой гликопротеин (S) — это вирусный белок слияния класса I, который опосредует проникновение SARS-CoV-2 в клетки хозяина. Он синтезируется в виде предшественника и подвергается протеолитическому расщеплению на субъединицы S1 и S2.
• Субъединица S1 содержит рецептор-связывающий домен (RBD), который взаимодействует с рецептором человека ACE2 (ангиотензинпревращающим ферментом 2), способствуя прикреплению вируса к клеткам хозяина. Связанные публикации: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Альтернативные пути проникновения используют нейропилин-1 (NRP1), NRP2, интегрины или ASGR1, что может влиять на тканевую тропизм, особенно в обонятельных эпителиальных клетках с низким уровнем экспрессии ACE2. Связанные публикации: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• Субъединица S2 опосредует слияние мембран через конформационную перестройку, зависящую от шарнира, переходя из предслиятельного состояния в послеслиятельное состояние шпильки, что требует расщепления в сайте S2' клеточными протеазами хозяина, такими как TMPRSS2 или катепсин L. Связанные публикации: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Стволевой домен S содержит три шарнира, обеспечивающие головке, связывающей рецептор, значительную ориентационную свободу, что может способствовать иммунному уклонению вируса. Связанные публикации: PMID:32817270
• Субклеточная локализация включает мембрану вириона, мембрану промежуточного компартмента эндоплазматической сети и аппарата Гольджи (ERGIC) хозяина и мембрану клетки хозяина, что соответствует его функциям в сборке, выходе вируса и проникновении.
• Белок интенсивно гликозилирован, содержит консервативные дисульфидные связи, спирально-коилеобразные области и трансмембранные домены; он также проявляет суперантигенные свойства и способствует иммунному уклонению.
• Его молекулярная масса составляет примерно 141 кДа, и он является ключевой мишенью для нейтрализующих антител, диагностических тестов и разработки вакцин.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Учитывая, что иммуногеном является рекомбинантный фрагмент 3CLpro (аминокислоты 1–306), используйте подходящие положительные контролы — например, лизаты клеток, инфицированных SARS-CoV-2, или очищенный рекомбинантный 3CLpro — для подтверждения специфичности.
• Для вестерн-блоттинга рекомендуется оптимизировать условия блокирования и разведения антитела; ожидается полоса с молекулярной массой примерно 34 кДа (полноразмерный 3CLpro), однако производитель указывает полосу 141 кДа, которая, вероятно, соответствует шиповому белку. Проверяйте обнаруженную полосу с использованием подходящих маркеров молекулярной массы и контрольных антигенов.
• В экспериментах по иммунофлуоресценции/ИКК включите этап пермеабилизации для детекции внутриклеточной протеазы и выполните контрокраску маркерами органелл для оценки субклеточной локализации.
• Для ИФА поликлональная природа антитела позволяет использовать его как в качестве захватывающего, так и детектирующего антитела в формате сэндвича. Для повышения специфичности и отношения сигнал/шум скомбинируйте его с моноклональными антителами к различным эпитопам.
• Учитывайте возможность перекрестной реактивности с 3CLpro других коронавирусов; выравнивание последовательностей и анализы конкурентного ингибирования могут помочь подтвердить специфичность.
• Всегда проводите валидацию антитела в вашей конкретной экспериментальной системе, так как его эффективность может меняться в зависимости от типа образца и методов фиксации.

CamelBio: ваш универсальный посредник по закупкам

CamelBio выступает как комплексный партнер по поиску сырья для ИВД, соединяя производителей диагностики и исследовательские лаборатории с валидированными парами антител, оптимизированными моноклональными и поликлональными антителами и объемными поставками вспомогательных реагентов. Наш портфель включает продукты для редких мишеней, такие как антитело к 3CLpro SARS-CoV-2, адаптированные под вирусные исследования и разработку диагностики. Независимо от того, нуждаетесь ли вы в получении пользовательских антител, масштабируемых поставках или технических консультациях, CamelBio упрощает ваш путь от концепции до клинических исследований.