Кроличье моноклональное антитело против POLR2A (N-конец) для Вестерн-блоттинга, ИП, ХИП, ИФА - P24928

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация POLR2A

• POLR2A кодирует самую большую каталитическую субъединицу РНК-полимеразы II (Pol II), которая синтезирует пре-мРНК и множество функциональных некодирующих РНК, используя в качестве субстратов нуклеозидтрифосфаты. Связанные ссылки: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Во время инициации транскрипции Pol II рекрутируется на промоторы ДНК, и POLR2A формирует активный центр вместе с POLR2B, внося DxDGD мотив, координирующий ион Mg²⁺, который необходим для добавления нуклеотидов. Связанные ссылки: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112

• Уникальный C-концевой домен (CTD), состоящий из 52 гептапептидных повторов, служит платформой для сборки факторов, регулирующих инициацию транскрипции, элонгацию, терминацию и сопутствующую процессингу транскриптов. Связанные ссылки: PMID:24207025, PMID:26124092

• POLR2A обладает внутренней 3'→5' экзонуклеазной активностью коррекции (proofreading), позволяющей удалять ошибочно включенные нуклеотиды путем обратного хода (backtracking) и расщепления фосфодиэфирной связи. Связанные ссылки: PMID:8381534

• Фосфорилирование CTD по Ser-5 опосредует уход с промотора, в то время как фосфорилирование Ser-2 необходимо для снятия паузы во время элонгации; метилирование и ацетилирование лизинов CTD тонко регулируют уровни экспрессии генов. Связанные ссылки: PMID:24207025, PMID:26124092

• Помимо ДНК-зависимой транскрипции, POLR2A может функционировать как РНК-зависимая РНК-полимераза, удлиняя некодирующие РНК и реплицируя геном вируса гепатита дельта во время инфекции. Связанные ссылки: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Белок локализуется в ядре, цитоплазме и на хромосомах, что отражает его динамическую роль в транскрипции и процессинге РНК.

• Альтернативный сплайсинг генерирует несколько изоформ, а варианты POLR2A, связанные с заболеваниями, ассоциированы с нарушениями нейроразвития (например, NEDHIB).

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Мишень иммуногена (а.о.550-650) находится в N-концевой области и консервативна у человека, мыши и крысы, что объясняет наблюдаемую перекрестную реактивность; для других видов рекомендуется проверить выравнивание последовательностей.
• При Вестерн-блоттинге ожидайте полосу около 217 кДа; используйте гель SDS-PAGE с низким процентом (например, 6%) и оптимизируйте условия переноса для высокомолекулярных белков.
• При хроматин-иммунопреципитации (ХИП) валидируйте специфичность антитела с помощью позитивных и негативных геномных локусов и оптимизируйте протоколы сшивания и фрагментации из-за большого размера комплекса Pol II.
• Для иммунопреципитации (ИП) мягкие условия лизиса и включение обработки нуклеазой могут улучшить растворимость связанного с хроматином POLR2A.
• Антитело также подходит для ИФА; рассмотрите возможность использования в паре с захватывающим антителом для сэндвич-детекции нативных комплексов Pol II.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio оптимизирует закупку сырья для IVD-диагностики для производителей диагностических систем и исследовательских лабораторий, предлагая валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, а также вспомогательные реагенты оптом. Для исследований транскрипции и РНК-полимеразы II это кроличье моноклональное антитело против POLR2A (N-конец) является частью более широкого портфеля, охватывающего ключевые субъединицы Pol II и факторы транскрипции. Благодаря своей интегрированной сети поставок CamelBio также помогает в поиске сырья для редких мишеней, помогая клиентам ускорить разработку от концепции до клиники.