Моноклональное антитело против PKM2 для ВБ, ИФ/ИКК, ИП, ИФА — P14618

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологические основы: функция и локализация PKM2

• PKM2 катализирует последнюю лимитирующую стадию гликолиза, перенося фосфорильную группу с фосфоенолпирувата (ФЕП) на АДФ с образованием АТФ. Активность фермента регулируется динамическим равновесием между высокоактивным тетрамером и практически неактивным димером, что определяет направление углеводов глюкозы на получение энергии или биосинтез. Связанные источники: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• Ген PKM образует две основные изоформы в результате альтернативного сплайсинга: взрослая изоформа M1 (PKM1) и эмбриональная изоформа M2 (PKM2). PKM2 обладает низкой собственной активностью пируваткиназы и требует аллостерической активации D-фруктозо-1,6-бисфосфатом (ФБФ), тогда как PKM1 постоянно активен. Связанные источники: PMID:18337823 PMID:20847263
• Помимо метаболической функции в цитоплазме, PKM2 работает как ядерная протеинкиназа. При воздействии стимулов, таких как активация рецептора ЭФР, PKM2 транслокирует в ядро и фосфорилирует мишени, включая STAT3 по Tyr-705 и гистон H3 по Thr-11, стимулируя транскрипцию генов, отвечающих за пролиферацию клеток, ангиогенез (например, VEGFA) и опухолевый рост. Связанные источники: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• PKM2 преимущественно экспрессируется в активно пролиферирующих клетках, включая эмбриональные стволовые клетки, клетки эмбриональной карциномы и раковые клетки, что делает его общепризнанным опухолевым биомаркером. Взрослая изоформа PKM1 экспрессируется в нормальных взрослых тканях и обычно отсутствует в опухолях. Связанные источники: PMID:18337823
• PKM2 локализуется как в цитоплазме, так и в ядре. Его ядерная транслокация индуцируется различными сигнальными путями и критически важна для его неметаболических онкогенных функций.
• Посттрансляционные модификации, такие как ацетилирование, фосфорилирование, гидроксилирование и метилирование, тесно регулируют метаболическую активность PKM2, стабильность белка и ядерный импорт, связывая метаболический статус клетки с сигнальными сетями.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген представляет собой синтетический пептид, охватывающий аминокислоты 380–480 человеческого PKM2 (NP_002645.3), который расположен в уникальной С-концевой области, отличающей PKM2 от изоформы M1. Эта конструкция обеспечивает высокую специфичность к PKM2 по сравнению с PKM1.
• Для Вестерн-блоттинга прогнозируемая молекулярная масса PKM2 составляет примерно 58 кДа. Проверяйте эффективность антитела с использованием подходящих положительных контролей (например, линий человеческих раковых клеток) и рассмотрите возможность оптимизации разведения первичного антитела и времени экспозиции.
• При иммунофлуоресценции/иммуноцитохимии (ИФ/ИКК) тестируйте различные протоколы фиксации и пермеабилизации для сохранения локализации PKM2, так как он может находиться как в цитоплазме, так и в ядре.
• Для иммунопреципитации (ИП) используйте нативные условия лизиса для сохранения белковых комплексов и подтверждайте эффективность захвата целевого белка.
• При проведении ИФА стройте стандартные кривые с рекомбинантным белком PKM2 и проверяйте чувствительность и специфичность в соответствующей матрице образца.
• Указана перекрестная реактивность с PKM2 мыши и крысы; проверяйте распознавание целевого белка в вашей конкретной экспериментальной системе с использованием контролей соответствующего вида.

CamelBio: ваш универсальный посредник по закупкам

CamelBio выступает как ваш комплексный универсальный партнер по закупкам сырья для ИВД, предлагающий интегрированный портфель услуг от концепции до клинических испытаний. Для исследователей, изучающих гликолиз, метаболизм опухолей и приложения в области раковых биомаркеров, CamelBio поставляет объемные вспомогательные реагенты, валидированные пары антител и оптимизированные моноклональные антитела, такие как это специфичное к PKM2 кроличье моноклональное антитело. Помимо стандартных продуктов, мы специализируемся на поставке сырья для редких мишеней, предоставляем технические услуги и консультации для оптимизации вашего процесса разработки диагностических продуктов.