Кроличья поликлональная антитело против фосфо-Zap70-Y319+Syk-Y352 для Вестерн-блоттинга, ИФ/ИК, ИФА — P43403/P43405

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация ZAP70

• ZAP70 (белок ассоциированный с дзета-цепью молекулярной массой 70 кДа) — это цитоплазматическая тирозинкиназа из семейства Syk, также известная как тирозинкиназа родственная Syk (SRK).
• Является необходимым компонентом сигналинга через Т-клеточный рецептор (TCR): после связывания антигена с TCR ZAP70 рекрутируется на фосфорилированные мотивы ITAM цепей CD3, где фосфорилируется и активируется киназой LCK, запуская каскад последующих сигнальных событий. Связанные публикации: PMID:7509083
• Активированный ZAP70 фосфорилирует адапторные белки LAT и LCP2, запуская сигнальную сеть, регулирующую активацию, пролиферацию, продукцию цитокинов и дифференцировку Т-лимфоцитов.
• Помимо сигналинга через TCR, ZAP70 регулирует адгезию Т-клеток, подвижность и реорганизацию цитоскелета; он также опосредует интернализацию и деградацию TCR через взаимодействие с CBL, SLA и SLA2, тем самым модулируя уровень рецептора на клеточной поверхности.
• ZAP70 также участвует в развитии и активации В-лимфоцитов через сигналинг В-клеточного рецептора (BCR).
• Во время развития тимицитов ZAP70 обеспечивает выживание и прогрессию клеточного цикла CD4/CD8 двойне отрицательных тимицитов до положительной селекции.
• Субклеточная локализация: преимущественно цитоплазматическая, но после стимуляции TCR транслокируется на плазматическую мембрану.
• Экспрессия в тканях: в основном в Т-лимфоцитах и естественных киллерах, более низкие уровни обнаруживаются в незрелых тимицитах и про/пре-В-лимфоцитах.
• К ключевым особенностям относятся N-концевые тандемные SH2-домены, которые связывают фосфорилированные ITAM, киназный домен с сайтом связывания АТФ и множество сайтов фосфорилирования (например, Y319), регулирующих активность; аннотируется такими характеристиками, как фосфопротеин, альтернативный сплайсинг и болезньассоциированные варианты.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфопептид, соответствующий участку Y319 человеческого ZAP70; антитело также распознает соответствующий фосфо-Y352 Syk из-за гомологии последовательности в районе сайта фосфорилирования.
• Для Вестерн-блоттинга рекомендуется использовать лизаты Т-клеточных линий, стимулированных антителом против CD3 или перванадатом для индукции выраженной фосфорилирования; обязательно включайте контроль дефосфорилирования (например, обработка λ-фосфатазой) для подтверждения фосфоспецифичности.
• При иммунофлуоресценции/иммуноцитохимии оптимизируйте условия фиксации и пермеабилизации для сохранения как фосфо-эпитопа, так и клеточной архитектуры; проводите контрокраску антителом к общему ZAP70 для оценки статуса активации клеток.
• Для ИФА можно использовать фосфо-пептид в качестве покрывающего антигена; убедитесь, что стадия блокировки позволяет минимизировать неспецифическое связывание.
• Перекрестная реактивность с мышиным белком позволяет проводить детекцию в моделях на мышиных Т-клетках; тем не менее, рекомендуется валидировать реактивность в конкретной экспериментальной системе.
• Предсказанная молекулярная масса ZAP70 составляет ~70 кДа; для Syk детектируется изоформа размером ~72 кДа. В Вестерн-блоттинге это может выглядеть как две близко расположенные полосы или одна полоса в зависимости от разрешения геля.

CamelBio: ваш единый центр закупок реагентов

Как универсальный партнер по закупке сырья для ИВД, CamelBio предоставляет производителям диагностических систем и исследовательским лабораториям надежные антительные пары, объемные партии вспомогательных реагентов и индивидуальные решения по закупке мишеней для исследования иммунного сигналинга. Это антитело против фосфо-Zap70/Syk подходит для исследования путей активации Т- и В-лимфоцитов, а мы предлагаем комплементарные антитела к общему белку, блокирующие буферы и услуги по поиску редких мишеней, чтобы упростить разработку вашего анализа от концепции до клинических испытаний.