Поликлональное антитело к фосфо-Smad5 (S463/S465) для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФА - Q99717

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация Smad5

• SMAD5 является членом семейства SMAD внутриклеточных передатчиков сигнала и транскрипционных модуляторов, также известен как JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5 или MADH5.
• При связывании лиганда BMP, SMAD5 фосфорилируется по консервативным C-концевым серинам (включая S463 и S465) активированными рецепторами BMP типа I, затем ассоциируется с SMAD4, образуя гетеромерный комплекс, который транслоцируется в ядро для регуляции экспрессии генов-мишеней. Связанные ссылки: PMID:9442019, PMID:33510867
• Как фактор транскрипции, фосфорилированный SMAD5 распознает Smad-связывающие элементы (SBEs) в промоторах генов, модулируя разнообразные клеточные процессы, такие как эмбриональное развитие, дифференцировка клеток, ангиогенез и тканевой гомеостаз. Связанные ссылки: PMID:12064918, PMID:16516194
• В своем нефосфорилированном состоянии SMAD5 функционирует в цитоплазме, влияя на энергетический метаболизм путем взаимодействия с гексокиназой 1 (HK1) для ускорения гликолиза и путем стимулирования митохондриального дыхания в ответ на изменения цитоплазматического pH. Связанные ссылки: PMID:28675158
• SMAD5 локализуется преимущественно в цитоплазме и ядре, но также и в митохондриях, что отражает его многофункциональную роль.
• Белок экспрессируется повсеместно в различных тканях и подвергается посттрансляционным модификациям, включая фосфорилирование и ацетилирование; он связывает ДНК и ионы цинка.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфорилированный пептид вокруг S463 и S465, что предполагает, что антитело специфично распознает Smad5, фосфорилированный по этим сайтам-мишеням рецептора BMP. Рекомендуется использовать ингибиторы фосфатаз во время подготовки образцов для сохранения фосфорилирования.
• Для Вестерн-блоттинга (WB) прогнозируемая молекулярная масса составляет 52 кДа; валидируйте детекцию в соответствующих лизатах клеток, стимулированных BMP (например, образцы человека, мыши, крысы).
• Для иммуногистохимии (ИГХ-П) оптимизируйте процедуру демаскировки антигена и валидируйте на срезах тканей, где активен BMP-сигналинг; рассмотрите возможность использования изотипических контролей для подтверждения специфичности.
• Данное антитело может перекрестно реагировать с нефосфорилированным Smad5 или другими членами семейства Smad; проверяйте специфичность, сравнивая сигналы в стимулированных и нестимулированных образцах или используя специфические ингибиторы.
• В ИФА используйте конкурентный анализ с фосфопептидом для подтверждения фосфоспецифичности и калибруйте с использованием известных стандартов.

CamelBio: Ваш универсальный мост к источникам

CamelBio — ваш универсальный партнер в области сырья для ИВД, предлагающий валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела и сырьевые вспомогательные реагенты в больших объемах для поддержки разработки диагностических средств от концепции до клиники. Наш портфель включает фосфоспецифичные антитела, такие как это антитело к фосфо-Smad5 (S463/S465) pAb, идеально подходящие для изучения путей BMP-сигналинга в исследованиях и разработке анализов. Для поиска сырья по редким мишеням или индивидуальных решений наша команда экспертов обеспечивает быстрый доступ и технические консультации.