Кроллино-моноклональное антитело к Anti-Phospho-Raf1-S621 для Вестерн-блоттинга (WB) и ИФА (ELISA) - P04049

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация RAF1 (c-Raf)

• RAF1 (также известный как c-Raf или Raf-1) — это серин/треониновая протеинкиназа, которая выступает в качестве критического регуляторного звена между ассоциированными с мембраной Ras-ГТФазами и каскадом MAPK/ERK, функционируя как переключатель, контролирующий судьбу клетки, включая пролиферацию, дифференцировку, апоптоз и выживание.
• Киназа инициирует каскад митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK), последовательно фосфорилируя двойные специфические MAPK-киназы (MAP2K1/MEK1 и MAP2K2/MEK2) и внеклеточно-регулируемые киназы (MAPK3/ERK1 и MAPK1/ERK2).
• RAF1 фосфорилирует разнообразные субстраты: BAD (по Ser-75, через PAK1), аденилатциклазы (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (ингибируя активность фосфатазы) и TNNT2; он также способствует активации NF-κB и ингибирует киназы ROCK2, ASK1 и MST2.
• Белок может защищать клетки от апоптоза, перемещаясь в митохондрии, где он связывается с BCL2 и вытесняет BAD; он также ограничивает активацию каспаз в ответ на стимуляцию Fas, апоптоз макрофагов, опосредованный патогенами, и эритроидную дифференцировку.
• RAF1 способствует онкогенной трансформации посредством подавления белка плотных контактов окклюдина (OCLN) путем индукции повышенной регуляции транскрипционного репрессора SNAI2/SLUG.
• Субклеточная локализация включает цитоплазму, клеточную мембрану, митохондрии и ядро, что отражает его многогранные регуляторные роли.
• Белок содержит домен цинкового пальца, связывает АТФ и подвергается фосфорилированию (например, S621), метилированию и альтернативному сплайсингу (изоформа 1 более abundant в скелетных мышцах).
• Ключевые слова, связанные с RAF1, включают кардиомиопатию, глухоту, вариант заболевания, протоонкоген и серин/треониновую протеинкиназу, что указывает на его участие как в нормальной физиологии, так и в патологии.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген представляет собой синтетический фосфорилированный пептид; убедитесь, что образцы обрабатываются ингибиторами фосфатаз для сохранения статуса фосфорилирования во время лизиса и подготовки.
• Для вестерн-блоттинга ожидайте полосу примерно при 73 кДа; включите соответствующие контроли, такие как лизаты, обработанные фосфатазой, или стимулированные и нестимулированные клетки для подтверждения фосфоспецифичности.
• Поскольку фосфорилирование RAF1 является динамическим, рассмотрите возможность использования общего антитела к RAF1 параллельно для нормализации сигналов и точной интерпретации изменений активации.
• В ИФА оптимизируйте концентрацию антигена для покрытия и разведение антитела; калибровочная кривая с известным фосфо-пептидом может помочь в количественной оценке.
• Сообщается о перекрестной реактивности с тканью крысы; проверьте работу антитела в вашей конкретной системе модели крысы, так как интенсивность сигнала может варьироваться между образцами.

CamelBio: Ваш мост для комплексного снабжения

CamelBio предоставляет производителям диагностических средств, лабораториям и исследовательским институтам комплексный доступ к сырью для IVD, техническим услугам и консалтингу — охватывая все этапы от концепции до клиники. Для исследований, сосредоточенных на сигнальной оси RAS-RAF-MEK-ERK, мы предлагаем обширный портфель, включая валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, вспомогательные реагенты оптом и поиск редкого сырья для мишеней для ускорения разработки ваших анализов.