Кроличьи поликлональные антитела Anti-Phospho-Raf1 (S259) для ВБ, ИП, ИФА - P04049

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологические основы: функция и локализация RAF1

• RAF1 (также известный как c-Raf или Raf-1) — это серин/треонин-протеинкиназа, которая выступает в качестве критического регуляторного звена между мембранными GTPазами Ras и сигнальным каскадом MAPK/ERK, управляя такими решениями судьбы клетки, как пролиферация, дифференцировка, апоптоз, выживание и онкогенная трансформация.
• После активации RAF1 инициирует каскад митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK) через последовательное фосфорилирование дуально-специфичных МАРК-киназ (MAP2K1/MEK1 и MAP2K2/MEK2) и внеклеточно-регулируемых киназ (MAPK3/ERK1 и MAPK1/ERK2).
• RAF1 фосфорилирует множество нижележащих мишеней, включая BAD (по Ser-75), аденилатциклазы (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (ингибируя активность фосфатазы) и TNNT2 (тропонин T сердечной мышцы), модулируя таким образом апоптоз, сигнализацию цАМФ и функцию сердца.
• Этот белок может стимулировать активацию NF-κB и ингибировать сигнальные трансдукторы, участвующие в подвижности (ROCK2), апоптозе (MAP3K5/ASK1 и STK3/MST2), пролиферации и ангиогенезе (RB1), что подчеркивает его широкие регуляторные функции.
• RAF1 участвует в онкогенной трансформации эпителиальных клеток за счет повышения экспрессии транскрипционного репрессора SNAI2/SLUG, который снижает экспрессию белка плотных контактов окклюдина (OCLN); он также ограничивает активацию каспаз в ответ на стимуляцию Fas, апоптоз макрофагов, опосредованный патогенами, и эритроидную дифференцировку.
• Субклеточно RAF1 локализуется в цитоплазме, клеточной мембране, митохондриях и ядре; транслокация в митохондрии обеспечивает связывание с BCL2 и вытеснение BAD, защищая клетки от апоптоза.
• Белок содержит цинк-фингерный домен, подвергается фосфорилированию (в том числе по Ser259, который распознает данное антитело) и участвует в заживлении ран, сигнализации Rho и миграции клеток.
• В скелетной мускулатуре изоформа 1 встречается в большем количестве, чем изоформа 2; RAF1 ассоциирован с такими заболеваниями, как кардиомиопатия и глухота (CMD1NN).

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфорилированный пептид, охватывающий сайт Ser259 человеческого RAF1. Такая конструкция теоретически нацелена на фосфорилированный эпитоп, однако пользователям следует валидировать фосфоспецифичность путем сравнения сигналов между лизатами, обработанными фосфатазой и необработанными, в своей экспериментальной системе.
• Поскольку антитело получено у кролика против человеческого пептида, перекрестная реактивность с другими видами не гарантируется; при использовании нечеловеческих моделей проведите валидацию в соответствующей системе образцов.
• Для Вестерн-блоттинга (ВБ) ожидается полоса с молекулярной массой около 73 кДа. Используйте подходящие условия блокировки и отмывки для минимизации неспецифического связывания, включите положительный контроль (например, лизат стимулированных клеток) для подтверждения фосфоспецифичного детектирования.
• В иммунопреципитации (ИП) и ИФА антитело может работать как заявлено; рекомендуется оптимизация концентрации антитела и условий буферов для вашего конкретного анализа.
• Избегайте повторных циклов замораживания-размораживания; разделите препарат на аликвоты и храните при -20°C или в соответствии с другими рекомендациями.

CamelBio: ваш универсальный мост по поиску реагентов

CamelBio — это ваш универсальный партнер по поиску сырья для ИВД, предлагающий валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, а также объемные вспомогательные реагенты для поддержки ваших диагностических и исследовательских проектов, связанных с RAF1. Наша комплексная цепочка поставок также упрощает поиск антител к редким мишеням и заказного сырья, создавая мост от концепции до клиники.