Кроличье моноклональное антитело против фосфо-Raf1-S259 для Вестерн-блоттинга и ИФА - P04049

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация RAF1

• RAF1 (также известный как c-RAF или Raf-1) представляет собой серин/треонин-протеинкиназу, которая является критическим регуляторным звеном между мембранными GTPазами Ras и нижестоящим сигнальным каскадом MAPK/ERK, контролируя такие решения судьбы клетки, как пролиферация, дифференцировка, апоптоз и выживание.
• После активации RAF1 фосфорилирует и активирует дуальные специфические киназы MEK1/2, которые в свою очередь фосфорилируют ERK1/2, распространяя сигналы, регулирующие экспрессию генов и клеточные ответы.
• Фосфорилированный RAF1 (например, по остаткам Ser-338 и Ser-339) напрямую фосфорилирует проапоптотический белок BAD, способствуя выживанию клеток. Он также фосфорилирует аденилатциклазы (ADCY2/5/6) и модулирует фосфатазу PPP1R12A.
• RAF1 влияет на множественные сигнальные пути: он может стимулировать активацию NF-κB, одновременно ингибируя эффекторы такие как ROCK2 (мобильность), ASK1/MST2 (апоптоз) и RB1 (пролиферация/ангиогенез).
• При апоптотических стимулах RAF1 может транслоцироваться в митохондрии, где связывается с BCL2 и вытесняет BAD, что обеспечивает дополнительный антиапоптотический механизм.
• RAF1 играет роль в миграции клеток путем регуляции сигналинга Rho и необходим для нормального заживления ран. Он также способствует онкогенной трансформации через транскрипционную репрессию белков плотных контактов таких как окклюдин (OCLN).
• Белок преимущественно локализуется в цитоплазме и на клеточной мембране, но при определенных условиях может также обнаруживаться в митохондриях и ядре.
• RAF1 экспрессируется в различных тканях; в скелетной мышце изоформа 1 встречается в большем количестве, чем изоформа 2.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфорилированный пептид с центральным остатком Ser259 человеческого RAF1 (P04049). Полученное антитело специфически распознает RAF1 только при фосфорилировании по Ser259; для подтверждения специфичности сравнивайте сигналы в образцах обработанных и не обработанных фосфатазой.
• Для Вестерн-блоттинга (ВБ) используйте белковый экстракт из клеток человека или крысы, которые экспрессируют RAF1. В восстановительных условиях должна наблюдаться полоса с молекулярной массой около 73 кДа. Всегда включайте соответствующие положительные и отрицательные контроли (например, лизаты после голодания в сыворотке против стимулированных факторами роста).
• Для ИФА проведите титрование антитела против фосфорилированного пептидного иммуногена и валидируйте в релевантной биологической матрице для обеспечения линейности детекции. Рекомендуется использовать в паре с антителом к общему RAF1 для нормализации уровня фосфорилирования.
• Поскольку антитело поставляется с ледяными пакетами, избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания и храните при рекомендованных условиях для сохранения активности.

CamelBio: ваш универсальный мост по поиску реактивов

CamelBio выступает в качестве комплексного моста по поиску сырья для ИВД (in vitro диагностики), предлагая надежные поставки валидированных антител, таких как этот фосфоспецифический клон RAF1, а также сопутствующие реактивы, оптовые заказы и услуги по индивидуальной разработке для поддержки ваших диагностических и исследовательских процессов. Независимо от того, нужны ли вам подобранные пары антител, вспомогательные ферменты или редкие специфические антитела к мишеням, наша платформа упрощает закупку от этапа открытия до клинического применения.