Кроличье поликлональное антитело Anti-Phospho-POLR2A CTD-S7 для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФА, ХиП - P24928

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация POLR2A

• POLR2A, также известный как RPB1 или POLR2, является крупнейшей субъединицей РНК-полимеразы II (Pol II) — ДНК-зависимой РНК-полимеразы, ответственной за синтез пре-мРНК и многих функциональных некодирующих РНК.
• Вместе со второй по величине субъединицей POLR2B она формирует каталитическое ядро, используя DxDGD-мотив, координирующий ионы Mg²⁺, для полимеризации нуклеотидов, а также обладает 3'→5' экзонуклеазной активностью для коррекции ошибок. Связанные ссылки: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Уникальный C-концевой домен (CTD) состоит из 52 тандемных гептапептидных повторов (YSPTSPS) и служит платформой для регуляторов транскрипции. Фосфорилирование по Ser5 облегчает выход из промотора, тогда как фосфорилирование по Ser2 необходимо для снятия паузы и элонгации. Связанные ссылки: PMID:24207025, PMID:26124092
• Ацетилирование лизинов в CTD активирует гены немедленного раннего ответа, индуцируемые факторами роста, в то время как метилирование и диметирование подавляют экспрессию генов-мишеней, тонко настраивая транскрипционный выход. Связанные ссылки: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A в основном локализуется в ядре, но также обнаруживается в цитоплазме и на хромосомах, что соответствует её динамичной роли в транскрипции.
• Выступает в качестве РНК-зависимой РНК-полимеразы, удлиняющей некодирующие РНК, и может функционировать как репликаза для вируса гепатита дельта.
• Ключевые слова, связанные с POLR2A, включают фосфопротеин, ацетилирование, метилирование, связывание с ДНК, связывание металлов, транскрипция, взаимодействие вируса с хозяином и варианты, связанные с заболеваниями, что отражает сложную регуляцию этого белка.
• Мутации в гене POLR2A связаны с нарушениями нейроразвития, такими как интеллектуальная недостаточность (NEDHIB).

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Для Вестерн-блоттинга используйте гель SDS-PAGE с низким процентом полиакриламида (например, 6% или градиентный) и влажный перенос для обеспечения эффективной трансферции белка массой 217 кДа.
• Включайте коктейли ингибиторов фосфатаз в буферы для лизиса для сохранения сигнала фосфорилирования по S7; рассмотрите возможность использования нефосфорилированного пептида или образца, обработанного фосфатазой, в качестве отрицательного контроля.
• При ИГХ-П оптимизируйте условия демаскировки антигена (цитратные или EDTA-содержащие буферы) и используйте полимерную систему детекции для усиления сигнала.
• Для ИФА используйте фосфопептид в качестве положительного контроля и соответствующий нефосфорилированный пептид для подтверждения специфичности.
• При проведении ХиП сшивайте белки с ДНК и фрагментируйте хроматин до фрагментов размером 200–500 п.н.; данное антитело может обогащать Pol II в промоторах активно транскрибируемых генов.
• Проверяйте работу антитела на соответствующем биологическом виде и в контексте исследуемой ткани перед масштабными экспериментами.

CamelBio: Ваш универсальный мост для поиска реагентов

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем и исследователям универсальную платформу для сырья для ИВД, поддерживая проекты от концепции до клиники. Это поликлональное антитело к фосфорилированному POLR2A (CTD-S7) удовлетворяет спрос на реагенты для исследований транскрипции, а наш портфель включает валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные антитела, вспомогательные реагенты в больших объемах и индивидуальный поиск редких мишеней. Сотрудничайте с CamelBio, чтобы оптимизировать ваши закупки и ускорить разработку анализов.