Кроличье поликлональное антитело против фосфо-POLR2A CTD-S5 для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФА - P24928

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация POLR2A (RPB1)

• Как крупнейшая субъединица РНК-полимеразы II, POLR2A/RPB1 формирует каталитическое ядро, ответственное за ДНК-зависимый синтез РНК, транскрибируя пре-мРНК и некодирующие РНК (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596). Связанные ссылки: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596

• Вместе с субъединицей POLR2B/RPB2 она формирует активный центр, содержащий Mg2+-координирующий мотив DxDGD, и обеспечивает 3'→5' экзонуклеазную коррекцию (proofreading) для обеспечения точности транскрипции (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Связанные ссылки: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112

• C-концевой домен (CTD) состоит из 52 тандемных повторов гептапептида (YSPTSPS) и подвергается динамическому фосфорилированию: фосфорилирование Ser5 (мишень данного антитела) способствует выходу из промотора, в то время как фосфорилирование Ser2 облегчает элонгацию и процессинг мРНК (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Связанные ссылки: PMID:24207025 PMID:26124092

• Помимо своей ДНК-зависимой роли, POLR2A проявляет РНК-зависимую РНК-полимеразную активность, участвуя в метаболизме некодирующих РНК и выступая в качестве репликазы для вируса гепатита дельта.

• В основном локализуется в ядре, POLR2A также шуттлирует в цитоплазму и ассоциирует с митотическими хромосомами, что отражает его многофункциональные регуляторные роли.

• Мутации в гене POLR2A связаны с нейронарушением развития с гипотонией, умственной отсталостью и характерными чертами лица (NEDHIB), подчеркивая его важнейшую роль в развитии человека.

• Посттрансляционные модификации CTD, включая ацетилирование и метилирование остатков лизина, обеспечивают дополнительный регуляторный уровень для экспрессии генов, причем ацетилирование имеет решающее значение для активации генов немедленного раннего ответа.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический пептид, разработанный для специфического распознавания фосфорилированного остатка Ser5 в контексте CTD-повтора; перекрестную реактивность с нефосфорилированным пептидом или другими фосфо-эпитопами (например, Ser2, Ser7) следует оценивать в соответствующей модельной системе.
• Для Вестерн-блоттинга (WB) ожидается основная полоса около 217 кДа, соответствующая полноразмерному белку POLR2A; включайте ингибиторы фосфатаз в лизирующие и электрофорезные буферы для сохранения фосфо-эпитопа.
• При иммуногистохимии (ИГХ-П) методы демаскировки антигена могут влиять на стабильность фосфо-эпитопа; протестируйте мягкие протоколы на основе цитрата или ЭДТА и валидируйте с соответствующими положительными и отрицательными фосфорилированными контролем.
• Для применения в ИФА может потребоваться иммобилизация фосфорилированного пептида и блокирование в условиях, сохраняющих специфичность антитела к фосфо-антигену.
• Перекрестная реактивность заявлена для образцов человека, мыши и крысы; однако, учитывая высокую консервативность последовательности CTD-повтора, при необходимости проверяйте специфичность для вашего конкретного организма-модели с помощью выравнивания последовательностей.

CamelBio: Ваш универсальный мост для поставок

CamelBio выступает в качестве надежного универсального партнера для закупки сырья для IVD, поддерживая производителей диагностических систем, исследовательские лаборатории и институты от начальной концепции до клинической готовности. Антитело против фосфо-POLR2A CTD-S5 является частью нашего растущего портфолио для исследований регуляции транскрипции и эпигенетики, дополненного валидированными парами антител, оптимизированными моноклональными и поликлональными антителами, вспомогательными реагентами оптом и возможностью поиска редких мишеней на заказ. Свяжитесь с нами, чтобы обсудить ваши конкретные потребности и узнать, как наша интегрированная цепочка поставок может оптимизировать ваш процесс разработки.