Кроличьи моноклональные антитела против фосфо-PAK1/2/3 (S144/S141/S139) для Вестерн-блоттинга и ИФА - Q13153 / Q13177 / O75914

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологическая характеристика: функция и локализация PAK1

• PAK1 (активированная p21 киназа 1, альфа-PAK) представляет собой серин/треонин-протеинкиназу, которая вместе с PAK2 и PAK3 относится к семейству PAK. Данное антитело распознает фосфорилированную форму консервативного остатка серина, эквивалентного S144 в PAK1, S141 в PAK2 и S139 в PAK3 — остатка, критически важного для активации киназы.
• Активируясь ГТФазами Rho CDC42 и RAC1, PAK1 связывает внеклеточные сигналы с внутриклеточными путями, контролирующими динамику цитоскелета, адгезию и миграцию клеток.
  Связанные источники: PMID:8805275 PMID:9528787
• PAK1 реорганизует актиновый цитоскелет, стимулируя формирование стрессовых волокон и фокальных адгезий, тем самым регулируя форму и подвижность клеток.
  Связанные источники: PMID:9032240 PMID:9395435
• Киназа регулирует апоптоз через фосфорилирование RAF1, которое в свою очередь фосфорилирует BAD и способствует его секвестрации в митохондриях.
  Связанные источники: PMID:11733498
• Субклеточная локализация PAK1 — цитоплазма, клеточные контакты, ламеллоподии, складки мембраны, инвакоподии, ядро и центросома, что соответствует его многосторонней роли в сигналинге и структуре клетки.
• Пост-трансляционные модификации включают аутофосфорилирование по множественным остаткам серина/треонина (в том числе S144) и ацетилирование, которые модулируют активность и локализацию белка.
• С клинической точки зрения PAK1 гиперэкспрессирован при раке желудка, стимулируя инвазию и миграцию опухолевых клеток, также он связан с развитием неврологических заболеваний.
  Связанные источники: PMID:25766321

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• При проведении Вестерн-блоттинга во время лизиса клеток/ткани рекомендуется использовать коктейли ингибиторов протеаз и фосфатаз для сохранения статуса фосфорилирования. Ожидаемая полоса для PAK1 имеет размер около 65 кДа, однако незначительные отличия размера могут наблюдаться у разных видов или быть вызваны пост-трансляционными модификациями.
• Специфичность фосфо-сигнала можно подтвердить обработкой образцов λ-фосфатазой или в экспериментах с пептидной конкуренцией с использованием нефосфорилированного пептида иммуногена.
• При проведении ИФА в качестве иммобилизованного антигена используют фосфорилированный пептид, соответствующий иммуногену, и включают подходящие контроли (нефосфорилированный пептид, пустой образец) для оценки специфичности антитела.
• Поскольку антитело распознает консервативный фосфорилированный сайт, общий для PAK1/2/3, рекомендуется подтвердить принадлежность белка к определенной изоформе в вашей системе с использованием тотальных антител к PAK, специфичных к изоформе, или с помощью нокдауна с использованием siRNA.

CamelBio: ваш единый центр закупок реагентов

CamelBio упрощает закупку сырья для производителей ИВД, предлагая обширный портфель валидированных фосфоспецифических антител, включая это моноклональное антитело против PAK1/2/3 (S144/S141/S139), созданное для исследования внутриклеточного сигналинга. Помимо отдельных реагентов мы предоставляем подобранные пары антител, крупные партии вспомогательных реагентов и услуги по индивидуальному поиску реагентов для сложных целей — мы соединяем производители диагностических систем с нужными компонентами на всех этапах от открытия до коммерциализации продукта.