Анти-фосфо-NF-kB p65/RelA (Ser468) кроличий моноклональный антитело для WB, IP, ELISA - Q04206

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация NF-kB p65/RelA

• Транскрипционный фактор p65 (RelA) является субъединицей p65 комплекса транскрипционного фактора NF-kB. Это плеотропный фактор, присутствующий почти во всех типах клеток, который служит конечной точкой для путей передачи сигналов, инициируемых разнообразными стимулами, связанными с воспалением, иммунитетом, дифференцировкой, ростом клеток, канцерогенезом и апоптозом.
• NF-kB функционирует как гомо- или гетеродимер белков, содержащих домен Rel. Наиболее распространенная форма — это гетеродимер RELA-NFKB1 (p65-p50). Эти димеры связываются с каппа-B сайтами ДНК с различным сродством, при этом комплексы RELA-NFKB1 и RELA-REL действуют как активаторы транскрипции.
• Активность NF-kB регулируется посредством множества механизмов, включая посттрансляционные модификации, компартментализацию внутри клетки и взаимодействия с кофакторами или корепрессорами. Неактивный NF-kB удерживается в цитоплазме ингибиторными белками I-kB; после опосредованной IKK фосфорилирования и деградации I-kB комплекс NF-kB высвобождается и транслокируется в ядро.
• RELA обладает слабым внутренним сродством к связыванию с ДНК, но вносит вклад в способность комплекса NF-kB связывать ДНК. Он также модулирует доступность хроматина на промоторах-мишенях, косвенно влияя на экспрессию генов.
• RELA необходим для экспрессии генов цитокинов в Т-клетках, играя ключевую роль в адаптивных иммунных ответах. Связанные ссылки: PMID:15790681
• Во время инфекции SARS-CoV-2 RELA действует как ключевой транскрипционный фактор, регулирующий интерфероновый ответ, что подчеркивает его роль в врожденном противовирусном иммунитете. Связанные ссылки: PMID:33440148
• Внутриклеточно RELA перемещается между цитоплазмой и ядром. Она подвергается обширным посттрансляционным модификациям, включая ацетилирование, метилирование, фосфорилирование (например, в положении Ser468, на которое направлено это антитело), S-нитрозилирование и убиквитин-подобное конъюгирование, которые модулируют ее активность, стабильность и взаимодействия.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Для вестерн-блоттинга (WB) готовьте лизаты, используя буфер RIPA с добавлением ингибиторов протеаз и фосфатаз для сохранения фосфорилированного сигнала в положении Ser468. Выполните SDS-PAGE и перенос, затем зондируйте с антителом при эмпирически определенном разведении.
• В экспериментах по иммунопреципитации (IP) убедитесь, что уровень экспрессии целевого белка достаточен в вашем лизате клеток или тканей. Кроличье происхождение антитела и его моноклональная природа могут способствовать чистому выделению при использовании вторичных реагентов, соответствующих виду.
• Для обнаружения методом ELISA рассмотрите возможность использования антитела в качестве реагента для захвата или детекции, валидируя линейность и специфичность в вашей аналитической системе с соответствующими фосфо-специфичными контролем.
• Поскольку антитело перекрестно реагирует с образцами человека, мыши и крысы, его можно использовать для сравнительных исследований на этих видах. Однако всегда проверяйте работоспособность, включая положительные и отрицательные контроли для каждого вида и условия обработки.
• Оптимизируйте концентрацию антитела для каждого применения и типа образца, так как рекомендуемые разведения могут варьироваться в зависимости от экспериментальных условий и методов детекции.

CamelBio: Ваш комплексный мост для закупок

CamelBio — ваш интегрированный партнер по реагентам для IVD, предоставляющий производителям диагностических средств и исследовательским учреждениям обширный портфель — от валидационных антител к кандидатам до объемных вспомогательных реагентов. В области исследований воспаления и иммунологии мы поставляем оптимизированные антитела, включая фосфо-специфические моноклональные антитела, подобные этому продукту anti-RelA (pS468), для ускорения разработки анализов. Наш опыт в цепочке поставок гарантирует стабильное качество и своевременную доставку критически важных реагентов к редким мишеням для поддержки ваших клинических и R&D программ.