Кроличья поликлональная антитело против фосфо-NF-kB p65/RelA-S536 для Вестерн-блоттинга, ИФ/ИЦХ, ИФА - Q04206

Основные спецификации и параметры продукта

Биологическое обоснование: Функция и локализация фактора транскрипции p65

• Субъединица NF-kappa-B p65 (RELA) является центральным фактором транскрипции семейства NF-kappa-B, кодирующим белок массой 60 кДа (также известный как p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3), который играет критическую роль в иммунном ответе и реакции на стресс. Запись UniProt Q04206.
• Комплекс NF-kappa-B существует в виде гомо- или гетеродимеров; гетеродимер RELA-NFKB1 (p50) является наиболее распространенным и функционирует как активатор транскрипции, связываясь со специфическими κB-ДНК мотивами в промоторах генов.
• Активация NF-kappa-B включает стимулируемую фосфорилирование и деградацию ингибиторов IκB, что освобождает комплекс RELA для транслокации из цитоплазмы в ядро. Фосфорилирование RELA по Ser536, расположенному в домене трансактивации, усиливает его транскрипционную активность и является маркером классической активации NF-κB.
• Субклеточная локализация RELA строго контролируется: в покоящихся клетках она преимущественно цитоплазматическая и связана с IκB; после индукции она накапливается в ядре для регуляции экспрессии генов-мишеней. Иммуннофлуоресценция может обнаруживать транслокацию в ядро как показатель активации пути.
• RELA подвергается обширной модификации путем фосфорилирования, ацетилирования, метилирования, S-нитрозилирования и убиквитинирования, что точно настраивает его транскрипционную активность. Он необходим для экспрессии цитокинов в Т-клетках (PubMed:15790681) и ответе интерферона I типа во время инфекции SARS-CoV-2 (PubMed:33440148). Связанные ссылки: PMID:15790681 PMID:33440148
• Ген RELA кодирует несколько изоформ, и его активность модулируется через взаимодействие с кофакторами и ремоделерами хроматина, что подчеркивает сложные уровни регуляции, выходящие за рамки простого попадания в ядро.

Экспериментальное руководство и технические советы

• Готовьте лизаты клеток или тканей с использованием коктейлей ингибиторов протеаз и фосфатаз для сохранения фосфорилирования по Ser536. Для Вестерн-блоттинга разделите белки с помощью SDS-PAGE и исследуйте с помощью этого антитела при начальном разведении, проверенном пользователем; ожидается сильная полоса вблизи 60 кДа.
• Для иммунофлуоресценции или иммунноцитохимии (IF/ICC) фиксируйте клетки 4% параформальдегидом и проводите адекватную пермеабилизацию; используйте подходящий буфер для блокировки для минимизации неспецифического связывания. Исследуйте транслокацию NF-kB p65 в ядро под действием воспалительных стимулов (например, обработка TNF-α) для валидации специфического фосфо-сигнала.
• В применениях ИФА рассмотрите возможность использования контроля блокировки фосфорилированным пептидом для подтверждения специфического обнаружения фосфорилирования. Титруйте антитело для определения оптимальных концентраций в вашем конкретном анализе.
• Динамика фосфорилирования может варьироваться в зависимости от типа клеток; всегда включайте положительные и отрицательные контроли (например, стимулированные и нестимулированные клетки) для точной интерпретации результатов.

CamelBio: Ваш мост для комплексных закупок

CamelBio предоставляет производителям диагностических средств, лабораториям и исследовательским институтам комплексное решение по закупке высококачественного сырья для IVD, технических услуг и консультаций — охватывая все этапы от концепции до клиники. Это анти-фосфо-NF-kB p65/RelA-S536 кроличье поликлональное антитело демонстрирует нашу приверженность поставке премиальных реагентов для иммуноанализов для изучения сигнального пути NF-kB, актуального для исследований воспаления, онкологии и иммунологии. Помимо отдельных антител, мы предлагаем валидированные пары антител, оптимизированные рекомбинантные белки и вспомогательное критическое сырье — все разработанное для оптимизации разработки ваших анализов.