Анти-Фосфо-NF-kB p65/RelA-S311 кроличья поликлональная антитело для ВБ, ИФА - Q04206

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация транскрипционного фактора p65

• NF-kappa-B представляет собой плейотропный транскрипционный фактор, присутствующий практически во всех типах клеток, и является конечной точкой множества каскадов передачи сигнала. Он образует гомо- или гетеродимеры; гетеродимерный комплекс RELA-NFKB1 является наиболее распространенным и действует как транскрипционный активатор.
• RELA (p65) связывается с сайтами каппа-В промоторов генов-мишеней с отличительной специфичностью и аффинностью, зависящими от состава димера, напрямую активирует транскрипцию, а также косвенно модулирует доступность хроматина для других факторов.
• В нестимулированных клетках комплексы NF-kappa-B находятся в неактивном состоянии в цитоплазме благодаря ингибиторам I-kappa-B. После стимуляции I-kappa-B фосфорилируется киназами IKK и деградирует, высвобождая RELA, который транслоцируется в ядро и инициирует экспрессию генов.
• RELA подвергается обширным посттрансляционным модификациям, включая фосфорилирование по множеству сайтов (например, S311), ацетилирование, метилирование и убиквитинирование, которые регулируют его активность, стабильность и взаимодействие с другими белками.
• Является необходимым для экспрессии генов цитокинов в Т-клетках, что подчеркивает его критическую роль в адаптивных иммунных ответах.
  Связанные источники: PMID:15790681
• Идентифицирован как ключевой транскрипционный фактор, регулирующий интерфероновый ответ при инфекции SARS-CoV-2. Связанные источники: PMID:33440148
• В покоящемся состоянии преимущественно локализован в цитоплазме, поскольку I-kappa-B маскирует сигнал ядерной локализации; после активации быстро накапливается в ядре.
• Аннотирован такими ключевыми характеристиками, как фосфопротеин, ацетилирование, метилирование, конъюгация Ubl, изопептидная связь и S-нитрозилирование, что отражает сложную регуляторную сеть, контролирующую этот мастерный транскрипционный фактор.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген — синтетический фосфопептид, охватывающий сайт S311 — разработан для получения антител, специфичных к фосфорилированной форме. Для подтверждения фосфоспецифичности обработайте лизаты лямбда-фосфатазой перед проведением Вестерн-блоттинга.
• Согласно спецификации производителя антитело подходит для ВБ и ИФА. Для ВБ используйте 20–30 мкг лизата цельных клеток и стандартный блокирующий буфер; проверьте размер полосы около 60 кДа с использованием подходящих положительных контролей (например, клеток HeLa, стимулированных TNF-α).
• Для ИФА рекомендуется иммобилизация фосфопептида с использованием его нефосфорилированной формы в качестве негативного контроля для подтверждения сайт-специфичного связывания.
• Антитело перекрестно реагирует с белками человека и мыши; рекомендуется провести первичную валидацию на релевантных клеточных линиях или тканях этих видов. Для усиления сигнала фосфорилирования рекомендуется индукция сигнального пути NF-kB такими стимулами, как TNF-α или PMA/иономицин.
• Избегайте жесткой стрипинга мембраны, который может изменить статус фосфорилирования; если требуется повторное зондирование, используйте буферы с низким pH или мягкие детергентные буферы.

CamelBio: ваш единый центр поставки реагентов

CamelBio поддерживает производителей диагностических систем и исследовательские группы интегрированными решениями по поставке сырья для всех этапов разработки — от концепции тест-системы до клинического применения. Данное антитело к фосфо-NF-kB p65 идеально вписывается в рабочие процессы исследований воспаления, иммунологии и онкологических биомаркеров, и мы можем дополнить его валидированными рекомбинантными белками, подобранными парами антител и вспомогательными детекционными реагентами. Наша портфолио включает массовые заказы моноклональных и поликлональных антител, реагенты к редким мишеням и разработку фосфориляционно-специфичных антител на заказ для оптимизации сборки наборов ИВД.