Поликлональное антитело Anti-Phospho-EGFR (T669) для WB, IP, ELISA - P00533

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация EGFR

• EGFR — это рецепторная тирозинкиназа, которая связывает лиганды семейства EGF (EGF, TGFA, AREG и др.), вызывая гомо- или гетеродимеризацию рецептора и аутофосфорилирование по ключевым цитоплазматическим остаткам, тем самым инициируя множественные сигнальные каскады. Связанные ссылки: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• Аутофосфорилированный EGFR рекрутирует адаптерные белки, такие как GRB2, активируя как минимум четыре основных нижестоящих пути: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC и STAT модули, которые регулируют пролиферацию, выживание и миграцию клеток. Связанные ссылки: PMID:27153536
• EGFR непосредственно фосфорилирует другие сигнальные белки, такие как RGS16 (активируя его GTPазную активность) и MUC1 (увеличивая его взаимодействие с SRC и бета-катенином), тем самым связываясь с сигнализацией G-белок-сопряженных рецепторов и процессами клеточной адгезии. Связанные ссылки: PMID:11602604, PMID:11483589
• Фосфорилирование по треонину 669 (T669) является критическим регуляторным событием, модулирующим киназную активность EGFR и нижележащую передачу сигналов, часто ассоциированное с активацией рецептора и трансдукцией сигнала.
• Изоформа 2 EGFR может функционировать как естественный антагонист действия EGF, обеспечивая дополнительный уровень регуляции сигналинга.
• EGFR также используется в качестве рецептора клетки-хозяина для проникновения вируса гепатита C, способствуя формированию рецепторных комплексов CD81-CLDN1.
• На субклеточном уровне EGFR локализован на клеточной мембране, в эндоплазматическом ретикулуме, аппарате Гольджи, ядре и эндосомах, причем трафикинг между компартментами влияет на выход сигнала.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический фосфопептид вокруг T669; для подтверждения специфичности к фосфорилированию обработайте образцы лямбда1 фосфатазой и наблюдайте потерю сигнала в Вестерн-блоттинге.
• Для WB рассмотрите использование качественного белкового маркера в диапазоне 130-140 кДа и включите соответствующие контроли загрузки. Валидируйте антитело в вашей целевой клеточной линии с известной экспрессией EGFR.
• В экспериментах по IP оптимизируйте соотношение антитело/лизат и подтвердите успешность иммунопреципитации с помощью ко-иммунопреципитации известных интеркторов EGFR или блоттинга с пан-специфичным антителом к EGFR.
• Протоколы ELISA могут требовать иммобилизации фосфорилированного пептида или полноразмерного белка; проведите титрование в шахматном порядке для определения оптимальных концентраций антитела и антигена.
• Перекрестная реактивность ограничена человеческим EGFR; при работе с образцами мыши или крысы валидируйте перекрестную реактивность экспериментально или рассмотрите вид-специфичные реагенты.
• Будучи кроличьим поликлональным антителом, используйте соответствующее вторичное антитело против кролика для детекции; учтите, что партии поликлональных антител могут различаться, поэтому титруйте каждую новую партию.

CamelBio: Ваш мост для комплексных поставок

CamelBio — это надежный партнер по комплексным поставкам сырья для IVD, предоставляющий валидированные антитела, антигены и вспомогательные реагенты для поддержки онкологических исследований и исследований передачи сигналов. Это поликлональное антитело anti-Phospho-EGFR-T669 является примером нашей приверженности поставке высококачественных фосфо-специфичных инструментов для изучения сигнальных путей, управляемых EGFR. От массового производства индивидуальных антител до поиска редких мишеней, CamelBio ускоряет разработку ваших диагностических средств от концепции до клиники.