Поликлональное антитело против PHD2/EGLN1 для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФ/ИЦХ, ИФА - Q9GZT9

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация PHD2/EGLN1

• PHD2/EGLN1 (гомолог Egl nine 1), также обозначаемый как HIF-пролилгидроксилаза 2 (HIF-PH2) или PHD2, является клеточным кислородным сенсором, кодируемым геном EGLN1. Принадлежит к семейству пролилгидроксилаз EGLN и является основной изоформой, регулирующей стабильность гипоксия-индуцибельного фактора (HIF) в условиях нормоксии.
• При нормальном уровне кислорода PHD2 катализирует гидроксилирование специфических пролиновых остатков в кислород-зависимых деградационных доменах (ODD) HIF-1α и HIF-2α. Эта посттрансляционная модификация способствует распознаванию комплексом E3 убиквитинлигазы фон Хиппель-Линдау (VHL), что приводит к протеасомной деградации HIFα субъединиц. Как следствие, HIF-опосредованные транскрипционные программы подавляются.
• Во время гипоксии активность PHD2 снижается, что позволяет HIFα белкам накапливаться, димеризоваться с HIF-1β и транслоцироваться в ядро, запуская экспрессию генов, вовлеченных в ангиогенез, эритропоэз, метаболическую адаптацию и выживание клеток. Этот механизм лежит в основе клеточной адаптации к сниженной доступности кислорода.
• PHD2 локализуется преимущественно в цитоплазме, но также может обнаруживаться в ядре, что соответствует его роли в детекции кислорода и модификации HIFα белков в обоих компартментах.
• Широко экспрессируется в различных тканях, с наибольшим уровнем мРНК в скелетных мышцах, сердце, мозге, почках и надпочечниках (PubMed:11056053; PubMed:12351678). Белок обнаруживается в кардиомиоцитах, аортальных эндотелиальных клетках и гладкомышечных клетках коронарных артерий. Фетальные ткани также демонстрируют значительную экспрессию, особенно в мозге, сердце, селезенке и скелетных мышцах (PubMed:12788921). Связанные ссылки: PMID:11056053 PMID:12351678 PMID:12788921
• PHD2 подвергается нескольким посттрансляционным модификациям, включая ацетилирование, фосфорилирование и S-нитрозилирование, которые могут модулировать его активность или стабильность. Для своей диоксигеназной активности он требует железа, 2-оксоглутарат и аскорбат (витамин C) в качестве кофакторов и содержит цинк-пальцевый домен.
• Мутации в гене EGLN1 ассоциированы с врожденным эритроцитозом 3 типа (ECYT3), что подчеркивает его критическую роль в регуляции эритропоэтина и продукции красных кровяных клеток.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном, использованным для получения этого поликлонального антитела, является рекомбинантный белок, охватывающий почти полную длину (аа 1-426) человеческого PHD2/EGLN1, соответствующий канонической последовательности. Такая конструкция может способствовать распознаванию эндогенного белка в различных применениях.
• Для применения в Вестерн-блоттинге (WB) должна наблюдаться специфичная полоса, соответствующая предсказанной молекулярной массе приблизительно 46 кДа. Рекомендуется оптимизация подготовки образцов, количества загрузки и условий детекции. Положительные контроли, полученные из тканей с высокой экспрессией PHD2, таких как скелетные мышцы или сердце, могут быть полезны.
• При иммуногистохимии (ИГХ-П) и иммунофлуоресценции (ИФ/ИЦХ) рекомендуется тестировать ряд методов демаскировки антигена и разведений антител. Учитывая двойную цитоплазматическую/ядерную локализацию PHD2, картину окрашивания следует оценивать в контексте кислородного статуса клетки. Соответствующие контроли типа ткани или клеточной линии (например, нормоксия против гипоксии) могут помочь в подтверждении специфичности.
• Для анализа на основе ИФА это антитело может быть подходящим в качестве улавливающего или детектирующего реагента после валидации в соответствующей матрице образца. Пользователям следует проводить тестирование на перекрестную реактивность и интерференцию в соответствии с требованиями их конкретного протокола.
• Хотя сообщается, что это антитело перекрестно реагирует с PHD2/EGLN1 мыши и крысы, рекомендуется проводить выравнивание последовательностей и пилотные эксперименты для подтверждения эквивалентной реактивности у этих видов для предполагаемого применения.

CamelBio: Ваш универсальный мост для поставок

CamelBio служит комплексным партнером по поставкам для производителей ИВД и исследовательских лабораторий, предлагая широкий портфель квалифицированных сырьевых материалов: от антител и рекомбинантных белков до вспомогательных реагентов. Это поликлональное антитело против PHD2/EGLN1 поддерживает исследования в области сигналинга гипоксии, ангиогенеза и открытия онкологических биомаркеров и является примером качества инструментов, доступных через нашу платформу. Нужны ли вам валидированные пары антител, моноклональные или поликлональные антитела оптом, или помощь в поиске труднодоступных мишеней — CamelBio оптимизирует ваш процесс закупок, чтобы ускорить разработку анализов от концепции до клинического применения.