Поликлональное антитело против Notch1 для Вестерн-блоттинга, ИГХ-П, ИФ/ИЦХ, ИФА - P46531

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация Notch1

• Notch1 (нейрогенный локус notch гомолог белок 1) — это трансмембранный белок типа I с однократным прохождением через мембрану, также известный как транслокация-ассоциированный notch белок TAN-1, кодируемый геном NOTCH1 у человека.
• Выполняет функцию рецептора для мембраносвязанных лигандов Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) и Delta-1 (DLL1), играя центральную роль в определении клеточной судьбы, дифференцировке, пролиферации и апоптозе.
• После активации лигандом внутриклеточный домен Notch (NICD) высвобождается и формирует комплекс транскрипционного активатора с RBPJ/RBPSUH для регуляции генов-мишеней, включая гены локуса усилителя расщепления (enhancer of split).
• Участвует в множественных процессах развития: ангиогенез (негативная регуляция пролиферации и миграции эндотелиальных клеток), созревание CD4+ и CD8+ клеток в тимусе, фолликулярная дифференцировка, развитие мозжечка через DNER, определение лево-правой симметрии через баланс цилий в лево-правом организаторе.
• Подавляет нейрональную и миогенную дифференцировку; может усиливать функцию HIF1A, секвестрируя HIF1AN; необходим для опосредованной THBS4 защитной астрогенеза после повреждения.
• Субклеточная локализация включает клеточную мембрану, мембрану поздних эндосом и ядро, что согласуется с его сигнальной и транскрипционной ролью.
• Экспрессируется в селезенке, стволе мозга и легких плода; у взрослых преимущественно обнаруживается в лимфоидных тканях.
• Посттрансляционные модификации включают гликозилирование, образование дисульфидных связей, гидроксилирование и фосфорилирование; белок подвергается протеолитическому процессингу и убиквитинированию.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует аминокислотам 2456-2555 человеческого Notch1 (NP_060087.3), расположенным в цитоплазматическом домене. Этот регион консервативен у человека, мыши и крысы, что подтверждает заявленную перекрестную реактивность.
• Для Вестерн-блоттинга рекомендуется использовать стандарт высокой молекулярной массы и гель с низким процентом полиакриламида (например, 6–8%) из-за большого размера белка (273 кДа). Для эффективного переноса на мембрану могут потребоваться увеличенное время трансфера.
• Валидируйте антитело в подходящей модельной системе, например, в клеточных линиях HeLa, Jurkat или других, известных экспрессией Notch1. В качестве положительного контроля для ИГХ-П может подойти ткань селезенки или ствола мозга.
• Для иммуногистохимии (парафиновые срезы) можно рассмотреть демаскировку антигена с использованием цитратного буфера (pH 6.0) или EDTA-буфера (pH 9.0) с нагреванием, хотя оптимальные условия следует определять экспериментально.
• При ИФ/ИЦХ для детекции внутриклеточных эпитопов рекомендуется пермеабилизация Triton X-100 или сапонином, так как иммуноген находится в цитоплазматическом хвосте.
• Notch1 подвергается протеолитическому процессингу; в Вестерн-блоттинге могут наблюдаться несколько полос. В зависимости от типа клеток и состояния активации можно детектировать полноразмерный предшественник (~300 кДа) и процессированные трансмембранные/цитоплазматические формы (~120 кДа и ~110 кДа).

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем, лабораториям и научно-исследовательским институтам комплексную платформу для поставок сырья для ИВД «все в одном». Для исследований, связанных с Notch1, и разработки тест-систем мы поставляем валидированные пары антител, оптимизированные поликлональные и моноклональные антитела, вспомогательные реагенты оптом, а также обеспечиваем доступ к сырью для редких мишеней. Наша интегрированная цепочка поставок и техническая поддержка оптимизируют ваш проект от концепции до клинического применения, гарантируя наличие критически важных реагентов для исследований в области биологии развития и сигналинга Notch.