Моноклональное антитело Anti-NLRP3 кролика для Вестерн-блоттинга, иммунопреципитации и ИФА — Q96P20

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический фон: функция и локализация NLRP3

• NLRP3 (белок 3, содержащий домены NACHT, LRR и PYD), также известный как криопирин, представляет собой цитозольный рецептор распознавания паттернов, выполняющий функцию сенсорного компонента инфламмасомы NLRP3. Связанные публикации: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• После активации патогенами, кристаллами или частицами окружающей среды NLRP3 олигомеризуется и рекрутирует ASC и прокаспазу-1, формируя комплекс инфламмасомы, который способствует активации каспазы-1; это приводит к расщеплению и секреции провоспалительных цитокинов IL-1β и IL-18, а также к пироптозу, опосредованному газдермином D. Связанные публикации: PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• Инфламмасома NLRP3 также обеспечивает нестандартную секрецию алармина HMGB1, усиливая воспалительные реакции. Связанная публикация: PMID:22801494
• В состоянии покоя NLRP3 поддерживается в аутоингибированном состоянии, связанном с АДФ; различные стимулы, вызывающие отток K+ и нарушение мембраны, запускают его конформационную активацию. Связанная публикация: PMID:35114687
• После активации NLRP3 транспортируется к центру организации микротрубочек (MTOC), где высвобождается из неактивного состояния под действием NEK7, а затем перемещается к везикулам диспергированной транс-сети Гольджи (dTGN), связываясь с фосфатидилинозитол-4-фосфатом (PtdIns4P), что приводит к сборке активной инфламмасомы. Связанные публикации: PMID:36442502, PMID:39173637
• Независимо от своей роли в инфламмасоме NLRP3 может действовать как регулятор транскрипции в Т-хелперных клетках 2-го типа (Th2), связываясь с ДНК и стимулируя экспрессию IL-4, что способствует дифференцировке Th2-клеток и имеет значение для аллергической астмы и роста опухолей.
• Внутри клетки NLRP3 локализуется в цитозоле, митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи, а также может секретироваться; преимущественно экспрессируется в макрофагах, дендритных клетках и эпителиальных барьерах, при этом более низкие уровни экспрессии наблюдаются в моноцитах и остеобластах.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген соответствует аминокислотам 100–210 вблизи N-концевого PYD-домена человеческого NLRP3; следует учитывать, что антитело может распознавать эпитоп в этом участке, что может иметь значение при анализе укороченных или мутантных конструкций.
• Для Вестерн-блоттинга валидируйте антитело на лизатах человеческих макрофагов или мононуклеарных клеток периферической крови, в которых экспрессия NLRP3 известна; ожидается полоса размером около 118 кДа.
• В экспериментах по иммунопреципитации обеспечьте оптимизированные условия лизиса для сохранения целостности комплекса NLRP3, поскольку мишень взаимодействует с несколькими белками инфламмасомы.
• Для применения в ИФА рекомендуется предварительно выполнить шахматные титрования с рекомбинантным NLRP3 или клеточными лизатами, чтобы определить оптимальные концентрации для сорбции и детекции.
• Поскольку активация NLRP3 может включать посттрансляционные модификации, например убиквитинирование и фосфорилирование, рассмотрите обработку клеток соответствующими стимулами, такими как LPS + нигерицин, чтобы наблюдать изменения в характере детекции.

CamelBio: универсальный источник материалов

CamelBio обеспечивает комплексный доступ к высококачественному сырью для ИВД, выступая закупочным партнёром для разработчиков диагностических систем и исследовательских лабораторий. Для исследований NLRP3 и инфламмасом мы поставляем оптимизированные моноклональные антитела, валидированные пары антител и вспомогательные реагенты в больших объёмах, опираясь на надёжные возможности снабжения для удовлетворения потребностей в разработке анализов от концепции до клинического применения.