Моноклональное антитело Anti-Mouse Ki67 () для проточной цитометрии (внутриклеточное окрашивание) — E9PVX6

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический фон: функция и локализация Ki67

• Ki67, кодируемый геном Mki67, представляет собой крупный белок-маркер пролиферации с молекулярной массой около 351 кДа (350864 Да согласно UniProt), который ассоциируется с митотическими хромосомами. На ранних этапах митоза он действует как репеллент хромосом, а на поздних этапах — как аттрактант хромосом, обеспечивая правильное расхождение и кластеризацию хромосом (PubMed:27362226). Связанные публикации: PMID:27362226
• На ранних этапах митоза Ki67 перемещается из ядрышек на поверхность хромосом, формируя вытянутые щёточкоподобные структуры. Эти структуры создают стерический и электростатический барьер, действуя как поверхностно-активное вещество, предотвращая коллапс хромосом и обеспечивая их независимую подвижность (PubMed:27362226). Связанные публикации: PMID:27362226
• В анафазе дефосфорилирование Ki67 и экспонирование консервативного основного участка запускают РНК-зависимое жидкость–жидкость фазовое разделение на поверхности хромосом, способствуя кластеризации хромосом и облегчая повторную сборку ядра. Этот фазовый переход превращает Ki67 из репеллента в аттрактант.
• Ki67 связывается с ДНК, отдавая предпочтение суперскрученной ДНК и ДНК, обогащённой последовательностями AT, а также связывается с незрелыми рибосомными РНК в анафазе, что способствует фазовому разделению. Однако он не участвует во внутренней структуре митотических хромосом (PubMed:26949251). Связанные публикации: PMID:26949251
• На субклеточном уровне Ki67 локализуется в ядрышке во время интерфазы и перемещается на поверхность хромосом во время митоза. Он преимущественно экспрессируется в пролиферирующих клетках, являясь надёжным маркером активации клеточного цикла.
• Посттрансляционные модификации включают ацетилирование, фосфорилирование и убиквитинирование, которые регулируют митотические функции и динамическую локализацию белка.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Для внутриклеточной проточной цитометрии используйте метод пермеабилизации, совместимый с ядерными антигенами, например буферы на основе метанола или сапонина, чтобы обеспечить доступ антитела к Ki67 в ядрышке и на хромосомах.
• Проведите титрование антитела в диапазоне 0,1–1 мкг на 10^6 клеток, чтобы определить оптимальную концентрацию окрашивания для конкретного типа клеток и протокола.
• Включите положительный контроль, например пролиферирующие клеточные линии мыши (например, NIH/3T3, CTLL-2) или стимулированные первичные лимфоциты, а также отрицательный контроль (например, изотипический контроль или покоящиеся клетки) для подтверждения специфичности окрашивания.
• Фиксируйте клетки без промедления, чтобы сохранить распределение Ki67; длительное хранение может повлиять на целостность эпитопа. Обычно применяют фиксацию параформальдегидом с последующей пермеабилизацией.
• Конъюгат совместим со стандартным обнаружением с использованием красного лазера (633–647 нм); при мультиплексном анализе обеспечьте использование подходящих наборов фильтров и минимальную компенсацию.

CamelBio: ваш универсальный партнёр по снабжению

CamelBio — ваш специализированный партнёр по снабжению сырьём для IVD, предлагающий комплексный ассортимент решений — от концепции до клинического применения. Это анти-Ki67-антитело входит в нашу линейку маркеров пролиферации клеток и онкологических маркеров, поддерживаемую возможностью поставки валидированных пар антител, оптимизированных рекомбинантных белков и вспомогательных реагентов. Независимо от того, нужны ли вам моноклональные антитела оптом или индивидуальные решения по сырью для разработки диагностических продуктов, свяжитесь с CamelBio для получения надёжной комплексной поддержки.