Моноклональное антитело кролика против MLKL для ВБ, ИФ/ИКК, ИГХ-П, ИФА - Q8NB16

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологическая справка: функция и локализация MLKL

• MLKL — это псевдокиназа, лишенная собственной протеинкиназной активности, которая выступает ключевым эффектором индуцированного TNF некроптотического клеточного гибели. Связанные публикации: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• После фосфорилирования RIPK3 MLKL образует гомотримеры и транслоцируется к плазматической мембране, где вызывает приток кальция и разрыв плазматической мембраны — основные признаки некроптоза. Связанные публикации: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• Помимо участия в цитоплазматическом некроптозе, MLKL также способствует запуску ядерного некроптоза при инфекции ортомиксовирусом. ZBP1 распознает вирусную Z-РНК и активирует RIPK3 в ядре, что приводит к фосфорилированию MLKL, разрушению ядерной оболочки и утечке цитоплазматической ДНК (по сходству последовательностей).

• Связь MLKL с инозитолгексакисфосфатом (InsP6) необходима для реализации его функции в процессе некроптоза, что связывает фосфоинозитидный сигналинг с выполнением программы клеточной гибели. Связанные публикации: PMID:29883610

• В субклеточном масштабе MLKL локализован преимущественно в цитоплазме, но после активации перемещается на клеточную мембрану и в ядро, что соответствует его двойной роли в разрушении клеточной мембраны и ядерной оболочки.

• Белок содержит N-концевую спираль-спиральную область и C-концевой псевдокиназный домен; ген подвержен альтернативному сплайсингу, в результате чего образуются изоформы, которые могут регулировать некроптоз или обладать неизвестными функциями.

• Пост-трансляционные модификации, в частности фосфорилирование, опосредованное RIPK3, критически важны для активации MLKL, его олигомеризации и таргетирования к мембране; другие модификации и взаимодействия могут тонко регулировать активность белка.

Экспериментальное руководство и технические рекомендации

• Используемый иммуноген охватывает аминокислотные остатки 369–471 C-концевого псевдокиназного домена человеческого MLKL (NP_689862.1). Данная область позволяет антителу распознавать как полноразмерный белок, так и любые его изоформы, содержащие этот участок; для подтверждения специфичности в вашей экспериментальной системе рекомендуется использовать контроль с РНК-интерференцией или нокаутом гена.

• При вестерн-блоттинге для человеческого MLKL ожидается полоса с молекулярной массой около 54 кДа. Оптимальное разведение следует подобрать эмпирически, используя в качестве положительного контроля лизаты клеток после индукции некроптоза (например, обработка TNF-альфа + миметик Smac + z-VAD-fmk).

• Для протоколов ИФ/ИКК и ИГХ-П может потребоваться обработка для извлечения антигена и пермеабилизация, оптимизированная под ваш тип образца. Стимуляция некроптоза приводит к обогащению MLKL на плазматической мембране, что можно использовать в качестве контроля динамической локализации.

• Протоколы ИФА можно разработать с использованием рекомбинантного белка MLKL или клеточных лизатов; для повышения чувствительности сэндвич-ИФА рекомендуется использовать парные наборы антител.

• Заявлена перекрестная реактивность с белками человека и мыши; тем не менее, перед проведением крупномасштабных исследований рекомендуется провести валидацию на соответствующем виде и ткани.

CamelBio: ваш универсальный партнер по закупке реагентов

CamelBio — это ваш интегрированный партнер в поиске сырья для ИВД, мы предлагаем валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные/поликлональные антитела, вспомогательные реагенты крупными партиями и поиск реагентов к редким мишеням для поддержки разработки ваших диагностических продуктов от идеи до клинических испытаний. Для исследований некроптоза и клеточной гибели мы предоставляем надежные поставки антител к MLKL и комплементарных реагентов для ускорения разработки анализаторы и открытия биомаркеров.