Моноклональное антитело против KIR2DL2/KIR2DL3 для Вестерн-блоттинга, IF/ICC, проточной цитометрии, ELISA - P43628

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: Функция и локализация KIR2DL2/KIR2DL3

• KIR2DL3 (Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3, также известный как CD158b, p58 NK receptor, NKAT2) — это трансмембранный гликопротеин I типа, член семейства KIR. Он функционирует как ингибиторный рецептор на естественных киллерах (NK-клетках) для специфических аллотипов HLA-C, включая HLA-Cw1, Cw3 и Cw7.
• Рецептор содержит два внеклеточных иммуноглобулин-подобных домена C2-типа, одну трансмембранную спираль и цитоплазматический хвост с иммунорецепторными тирозин-содержащими ингибиторными мотивами (ITIM), которые рекрутируют фосфатазы для блокировки активирующих сигналов.
• Экспрессия KIR2DL3 в основном ограничена NK-клетками, где он опосредует толерантность к собственным антигенам и осуществляет "патрулирование" на предмет потери "своего" (missing-self), мониторя экспрессию MHC класса I на клетках-мишенях.
• Связывание лиганда с KIR2DL3 подавляет цитотоксичность, опосредованную NK-клетками, предотвращая лизис здоровых клеток, но позволяя уничтожать клетки, которые снизили экспрессию HLA-C.
• Внеклеточный домен подвергается N-гликозилированию и образованию дисульфидных связей, что объясняет наблюдаемые множественные формы с разной молекулярной массой (~27 кДа негликозилированная и ~37–38 кДа гликозилированная).
• KIR2DL2, кодируемый отдельным геном, имеет примерно 96% идентичности аминокислотной последовательности с KIR2DL3 и проявляет сходную специфичность к HLA‑C; иммуноген антитела (а.о. 22‑245 KIR2DL3) охватывает область, консервативную для обоих рецепторов, что позволяет проводить перекрестное детектирование.
• Альтернативный сплайсинг транскрипта KIR2DL3 может приводить к образованию вариантов с измененными свойствами связывания лиганда или передачи сигнала, хотя полноразмерный изоформ является преобладающей функциональной формой.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• При Вестерн-блоттинге ожидайте полосы около 27 кДа (негликозилированная форма) и 37–38 кДа (гликозилированная форма). Используйте восстанавливающие условия и в качестве позитивного контроля наносите общие лизаты KIR-позитивных линий NK-клеток (например, NK92, YTS). Рассмотрите возможность дегликозилирования с PNGase F для упрощения картины полос.
• Поскольку иммуноген охватывает внеклеточный домен, антитело распознает нативный поверхностный рецептор; для проточной цитометрии и иммунофлуоресценции при окрашивании поверхности не требуется пермеабилизация. Титруйте антитело и включайте изотипический контроль для подтверждения специфичности на человеческих PBMC или выделенных NK-клетках.
• Для применения в ELISA это моноклональное антитело может служить захватывающим или детектирующим реагентом; при создании сэндвич-иммуноанализа используйте пару с антителом к отдельному эпитопу. Проводите валидацию с рекомбинантным белком KIR2DL3 или клеточными лизатами.
• Подтвердите перекрестную реактивность с KIR2DL2, тестируя на клеточных линиях, экспрессирующих каждый рецептор по отдельности (например, трансфектанты 293T), учитывая высокую гомологию последовательностей.
• Из-за полиморфизма KIR картина окрашивания может различаться у разных доноров; оптимизируйте концентрацию антитела для каждого применения и типа клеток.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем, лабораториям и исследовательским институтам единую точку доступа к сырьевым материалам для IVD, техническим услугам и консалтингу. Наш портфель включает валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, вспомогательные реагенты оптом, а также поиск редких мишеней для поддержки исследований в области иммуноонкологии и NK-клеток. С этим антителом против KIR2DL2/KIR2DL3 мы обеспечиваем точное детектирование рецептора для функциональных анализов и разработки диагностических средств.