Моноклональное антитело против HLA-DR для WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA — P01903

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический фон: функция и локализация альфа-цепи HLA-DR

• HLA-DRA (также известный как HLA-DRA1) — это ген на 6-й хромосоме, кодирующий альфа-цепь молекул MHC класса II; расчётная молекулярная масса составляет приблизительно 29 кДа (зрелая форма — около 26 кДа после отщепления сигнального пептида).
• Кодируемая альфа-цепь соединяется с бета-цепью HLA-DRB, образуя функциональные гетеродимеры HLA-DR, которые презентируют антигенные пептиды CD4-положительным T-клеткам, направляя эффекторные функции T-хелперов и активацию макрофагов (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Связанные источники: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Загрузка антигенных пептидов проходит по двум различным механизмам обработки: «сначала связывание, затем разрезание/обрезка» для пептидов, происходящих от патогенов, и «сначала разрезание, затем связывание» для собственных пептидов; при этом N-концевой якорный остаток (обычно крупная гидрофобная аминокислота) имеет важнейшее значение для связывания с MHCII (PubMed:25413013, PubMed:8145819). Связанные источники: PMID:25413013 PMID:8145819
• В микроокружении опухоли HLA-DR презентирует антигены опухолевого происхождения, захваченные антиген-презентирующими клетками посредством фагоцитоза или макропиноцитоза, способствуя противоопухолевым ответам CD4+ T-клеток (PubMed:31495665). Связанные источники: PMID:31495665
• Комплекс HLA-DR циркулирует через эндосомальные и лизосомальные компартменты, включая аутофаголизосомы, где он презентирует пептиды внутриклеточных белков, образовавшиеся в результате аутофагии; этот механизм имеет критическое значение для селекции T-клеток в тимусе и формирования центральной толерантности (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Связанные источники: PMID:17182262 PMID:23783831
• HLA-DRA экспрессируется на уровне белка в профессиональных антиген-презентирующих клетках — макрофагах, дендритных клетках, B-клетках — и в эпителиальных клетках тимуса, что соответствует его роли в адаптивном иммунитете (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Связанные источники: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• HLA-DRA является трансмембранным гликопротеином, содержащим дисульфидные связи и потенциальные сайты убиквитинирования (изопептидная связь), что может влиять на его стабильность и транспортировку во время формирования иммунологического синапса.

Рекомендации по экспериментам и технические советы

• Разработка иммуногена: антитело было получено против пептида в пределах аминокислот 100–200 человеческого HLA-DRA; ожидается, что оно будет распознавать зрелый эктодомен. Перекрёстная реактивность с другими видами не гарантируется, но при необходимости её можно проверить.
• Вестерн-блоттинг (WB): используйте восстановительные условия и маркер молекулярной массы; выявляемая полоса должна находиться на уровне приблизительно 29 кДа. Включите в качестве положительного контроля лизат клеточных линий B-клеток человека (например, Raji) или PBMC.
• Иммунофлуоресценция (IF/ICC): пермеабилизируйте клетки с помощью 0,1% Triton X-100, чтобы обеспечить доступ антитела к внутриклеточным эпитопам; HLA-DR локализуется преимущественно на поверхности клеток и в эндоцитарных компартментах. Используйте антиген-презентирующие клетки человека или клеточные линии, экспрессирующие HLA-DR, в качестве положительных контролей.
• Иммуногистохимия парафиновых срезов (IHC-P): перед инкубацией проведите тепловую демаскировку антигенов в цитратном буфере (pH 6,0); валидируйте окрашивание на лимфоидных тканях человека (миндалины, селезёнка), для которых известно наличие MHCII.
• ELISA: антитело можно использовать в формате сэндвич-ELISA с парным антителом для детекции; валидируйте метод с использованием рекомбинантного белка HLA-DR или планшетов, покрытых пептидом.

CamelBio: ваш универсальный источник поставок

CamelBio предлагает оптимизированную универсальную платформу для закупки сырья для IVD, включая это валидированное моноклональное антитело против HLA-DR и дополнительные реагенты, такие как парные антигенные системы и антитела для детекции. Наш каталог, ориентированный на иммунологию, поддерживает разработку диагностических тестов, нацеленных на молекулы MHC класса II, а наши технические специалисты могут помочь адаптировать форматы реагентов и масштабировать поставки в соответствии со сроками реализации вашего проекта.