Поликлональное антитело Anti-EIF3J для вестерн-блоттинга, иммунофлуоресценции/ИЦХ, ИФА - O75822

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация EIF3J

• Идентификация белка: EIF3J (Эукариотический фактор инициации трансляции 3, субъединица J), также известный как EIF3S1, eIF3-p35, eIF3-alpha, кодируется геном EIF3J (ID гена 8669). Является основной субъединицей комплекса eIF3 массой около 800 кДа.
• Ключевая функция в инициации трансляции: EIF3J — компонент комплекса eIF-3, необходимого для эукариотического синтеза белка. eIF-3 связывается с 40S рибосомной субъединицей и облегчает рекрутинг eIF-1, eIF-1A, eIF-2:GTP:метионил-тРНКi и eIF-5 для формирования 43S пре-инициаторного комплекса (43S PIC). Также стимулирует рекрутинг мРНК к 43S PIC и сканирование для распознавания старт-кодона AUG. Связанные ссылки: PMID:25849773, PMID:27462815
• Рециклинг рибосом: Комплекс eIF-3 необходим для разборки и рециклинга пост-терминационных рибосомных комплексов, предотвращая преждевременное соединение субъединиц 40S и 60S до инициации.
• Регуляторная роль в трансляции: Комплекс eIF-3 избирательно нацеливается на подмножество мРНК, участвующих в пролиферации, дифференцировке и апоптозе клеток, и контролирует их трансляцию, используя различные режимы связывания со стебель-петлевыми структурами РНК для осуществления либо активации, либо репрессии трансляции. Связанные ссылки: PMID:25849773
• Субклеточная локализация: Преимущественно цитоплазматическая, что согласуется с её ролью в инициации трансляции на цитоплазматических рибосомах.
• Посттрансляционные модификации: Согласно протеомным исследованиям, EIF3J может быть ацетилирован, фосфорилирован, модифицирован образованием изопептидной связи (убиквитин-подобная модификация) и убиквитинирован. Эти модификации могут регулировать сборку и активность комплекса.
• Альтернативный сплайсинг: Существует несколько транскрипционных вариантов EIF3J, потенциально дающих изоформы с различными функциями или паттернами экспрессии.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: Антитело получено против рекомбинантного белка, покрывающего аминокислоты 1–258 белка EIF3J человека. Эта N-концевая область, вероятно, консервативна у разных видов, что объясняет наблюдаемую перекрестную реактивность с мышиным и крысиным белком. Антитело должно детектировать полноразмерный эндогенный EIF3J в соответствующих видах.
• Вестерн-блоттинг (WB): Используйте тотальные клеточные лизаты образцов человека, мыши или крысы. Предсказанная молекулярная масса — около 29 кДа. Для подтверждения специфичности используйте контроли с нокдауном или сверхэкспрессией гена, оптимизируйте количество загружаемого белка, чтобы избежать насыщения.
• Иммунофлуоресценция/ИЦХ: EIF3J локализуется в цитоплазме; для пермеабилизации клеток используйте мягкий детергент (например, 0.1% Triton X-100) и блокирующий буфер с сывороткой, соответствующей виду-хозяину вторичного антитела. Начните тестирование разведений антитела с 1:50–1:200.
• ИФА: Подтвердите связывание с использованием рекомбинантного белка EIF3J или пептида, соответствующего последовательности иммуногена. Оптимизируйте концентрацию иммобилизации (обычно 1–10 мкг/мл) и условия детекции.
• Обработка образцов: Доставка осуществляется в термосумках со льдом; после получения храните аликвоты при -20°C до -80°C. Избегайте повторных циклов заморозки-оттаивания.

CamelBio: Ваш мост к комплексным поставкам

CamelBio предоставляет производителям диагностических систем, лабораториям и исследовательским институтам единую точку доступа к сырью для ИВД, техническим услугам и консалтингу — охватывая каждый этап от концепции до клиники. Для EIF3J и других факторов инициации трансляции CamelBio может поставить валидированные пары антител, оптимизированные поликлональные антитела, вспомогательные реагенты в больших объемах и сырье для редких мишеней. Используйте нашу сеть поставок, чтобы ускорить разработку ваших аналитических систем и исследования в области синтеза белка.