Моноклональное антитело к ДНК-полимеразе гамма для Вестерн-блота, ИФА — P54098

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация ДНК-полимеразы гамма

• Субъединица ДНК-полимеразы гамма-1 (POLG) является каталитическим ядром митохондриальной ДНК-полимеразы, отвечает за репликацию всего митохондриального генома. Она синтезирует как тяжелую, так и легкую цепь, используя матрицу одновитковой ДНК и РНК-праймеры, и функционирует как высокопроцессивный реплисом вместе с геликазой TWNK и белком SSBP1. Связанные источники: PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLG обладает 3'→5' экзонуклеазной активностью коррекции ошибок, которая исправляет замены оснований, одновосновные вставки и делеции, обеспечивая высокую точность при репликации мтДНК. При неправильной вставке нуклеотида фермент переходит в режим нуклеолитического редактирования для удаления ошибочного нуклеотида. Связанные источники: PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• После завершения синтеза мтДНК POLG опосредует 3'→5' экзонуклеолитическую деградацию в месте разрыва для обеспечения правильной лигации, а также обладает 5'-дезоксирибозофосфатной (dRP) лиазной активностью, что позволяет ей участвовать в пути базовой эксцизионной репарации митохондриальной ДНК. Связанные источники: PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Мутации в гене POLG связаны с целым спектром митохондриальных заболеваний, включая прогрессирующую внешнюю офтальмоплегию (PEO), нейропатии, эпилепсию и синдром Ли. Это основной ген митохондриальных заболеваний, ассоциированный с синдромами деплеции и делеций митохондриальной ДНК.
• Белок локализуется в митохондриальном матриксе и является компонентом митохондриального нуклеоида, где он ассоциируется с мтДНК для обеспечения репликации и поддержания целостности генома.
• POLG — это крупный многофункциональный фермент (около 140 кДа), относящийся к семейству ДНК-полимераз типа А. Для проявления полимеразной и экзонуклеазной активности ему требуются ионы магния.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген, использованный для получения этого антитела, соответствует пептиду С-концевой области (аминокислоты 1140–1239) человеческого POLG. Этот эпитоп расположен вне каталитических доменов и может обеспечивать распознавание как дикого типа, так и некоторых мутантных форм белка. Тем не менее, для каждой экспериментальной системы необходимо проверять доступность эпитопа в нативных и денатурирующих условиях.
• Для вестерн-блота предсказанная молекулярная масса составляет 140 кДа. Используйте гель с подходящей процентной концентрацией и условия переноса для белков высокой молекулярной массы, включите положительный контроль, например, лизат митохондрий клеток человека или мыши.
• Перекрестная реакция с мышиной POLG подтверждена, поэтому это антитело подходит для исследований на мышиных моделях митохондриальных заболеваний. Благодаря высокой консервативности последовательности возможна перекрестная реакция с другими видами, но это требует эмпирической валидации.
• Для ИФА антитело можно использовать в качестве захватывающего или детектирующего реагента. Титруйте антитело для определения оптимальной рабочей концентрации и убедитесь, что покрывающий антиген содержит С-концевой эпитоп или рекомбинантный фрагмент POLG, охватывающий область иммуногена.
• Обратите внимание, что экспрессия POLG встречается во всех тканях, но повышена в тканях с высокой потребностью в энергии. Рекомендуем проверить чувствительность детекции в соответствующих системах проб, например препаратах митохондрий печени, мышц или мозга.

CamelBio: ваш универсальный партнер по закупкам

CamelBio выступает в качестве комплексного партнера по закупкам для производителей ИВД-систем и научных исследователей, предоставляя быстрый доступ к валидированным парам антител, оптимизированным моноклональным антителам, вспомогательным реагентам в больших объемах и услугами поиска редкого сырья под заказ. Для исследований, посвященных репликации и репарации митохондриальной ДНК, мы предоставляем это высококачественное антитело к POLG вместе с комплементарными реагентами, чтобы ускорить ваши разработки в области диагностики. Наша интегрированная модель поставки поддерживает все этапы проектов от идеи до клинических испытаний, помогая вам снизить сложность закупок и сократить сроки выполнения заказов.