Моноклональное антитело кролика Anti-DARPP32 для WB, ELISA — Q9UD71

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический фон: функция и локализация DARPP32 (PPP1R1B)

• DARPP32, кодируемый геном PPP1R1B, представляет собой бифункциональную молекулу передачи сигнала, интегрирующую сигналы дофамина и цАМФ посредством регуляции протеинфосфатазы 1 (PP1) и протеинкиназы A (PKA).
• При фосфорилировании по Thr34 протеинкиназой A он действует как мощный ингибитор PP1, вызывая изменения фосфорилирования нижестоящих нейрональных субстратов и модулируя синаптическую пластичность.
• Белок также фосфорилируется по Thr75 циклинзависимой киназой 5 (CDK5), что превращает его в ингибитор PKA и демонстрирует его роль молекулярного переключателя в нейронах полосатого тела.
• DARPP32 преимущественно локализован в цитоплазме и в высокой концентрации присутствует в средних шипиковых нейронах полосатого тела, где он опосредует эффекты дофамина, глутамата и других нейромедиаторов.
• Альтернативный сплайсинг транскрипта PPP1R1B приводит к образованию нескольких изоформ, включая хорошо охарактеризованную полноразмерную форму и усечённый вариант, которые могут обладать различными функциональными свойствами.
• Посттрансляционные модификации, такие как ацетилирование и фосфорилирование в нескольких участках, тонко регулируют его активность, стабильность и внутриклеточное распределение.
• Нарушение регуляции передачи сигналов DARPP32 связывают с неврологическими и психиатрическими заболеваниями, включая болезнь Паркинсона, шизофрению и наркотическую зависимость.
• Теоретическая молекулярная масса канонической изоформы составляет приблизительно 23 кДа, что соответствует наблюдаемой полосе при вестерн-блоттинге.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Для вестерн-блоттинга используйте свежеприготовленный RIPA-буфер, содержащий ингибиторы фосфатаз и протеаз, чтобы сохранить статус фосфорилирования DARPP32.
• Рекомендуется использовать восстановительный буфер для нанесения образцов и нагревать образцы при 70 °C в течение 10 минут, чтобы избежать артефактов агрегации, часто наблюдаемых для DARPP32.
• Иммуноген соответствует N-концевому участку (аминокислоты 1–100); это антитело должно распознавать как полноразмерный белок, так и некоторые N-концевые фрагменты.
• В связи с высокой степенью консервативности последовательности специфичность антитела следует подтверждать на образцах с нокаутом или нокдауном с использованием siRNA, особенно при работе с тканями мыши или крысы.
• Для ELISA определите оптимальную концентрацию сорбции методом шахматного титрования, используя иммунизирующий пептид или рекомбинантный белок DARPP32 в качестве стандарта.
• В каждый эксперимент включайте известный положительный контроль (например, лизат ткани полосатого тела) и отрицательный контроль (например, линию ненейрональных клеток).
• Поскольку в некоторых образцах DARPP32 является фосфопротеином с низким содержанием, для его обнаружения могут потребоваться стратегии усиления сигнала, например использование высокочувствительных ECL-субстратов.

CamelBio: ваш универсальный партнёр по поиску поставщиков

CamelBio — ваш комплексный партнёр по поиску сырья для ИВД, предоставляющий валидированные антитела, белки антигенного качества и вспомогательные реагенты, необходимые для разработки анализов. Это кроличье моноклональное антитело Anti-DARPP32 поддерживает нейронаучные исследования и диагностические применения, направленные на изучение сигнальных путей дофамина/цАМФ. Используйте наши возможности поставок для оптовых заказов, индивидуальных составов и поиска редких мишеней, чтобы ускорить реализацию вашего проекта от концепции до клинического применения.