Кроличья моноклональная антитело к CD68 для WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация CD68

• CD68, также известный как макросиалин, GP110, LAMP4 или SCARD1, представляет собой высокогликозилированный трансмембранный белок типа I, принадлежащий к семейству лизосомальных/эндосомных ассоциированных мембранных гликопротеинов (LAMP). Он содержит муциноподобный домен и трансмембранную спираль.
• Альтернативный сплайсинг гена CD68 приводит к образованию нескольких изоформ, что может обусловливать функциональное разнообразие белка в разных типах клеток и клеточных компартментах.
• CD68 играет ключевую роль в фагоцитарной активности тканевых макрофагов, участвуя как во внутриклеточном лизосомальном метаболизме, так и во внеклеточных взаимодействиях между клетками и между клеткой и патогеном. Он связывается с тканеспецифичными и органоспецифичными лектинами или селектинами, тем самым облегчая миграцию субпопуляций макрофагов в определенные участки тканей.
• Белок подвергается быстрой рециклизации между эндосомами, лизосомами и клеточной мембраной — этот динамический процесс, вероятно, позволяет макрофагам передвигаться по субстратам или другим клеткам, несущим селектины.
• Субклеточная локализация CD68 в основном приходится на клеточную мембрану, мембрану эндосом и мембрану лизосом, что соответствует его роли в везикулярном траффике и поверхностной адгезии.
• CD68 интенсивно экспрессируется в моноцитах крови и тканевых макрофагах. В меньшей степени он обнаруживается в лимфоцитах, фибробластах, эндотелиальных клетках и многочисленных опухолевых клеточных линиях. В опухолях экспрессия CD68 может способствовать опосредованной селектинами адгезии к эндотелию сосудов, потенциально способствуя метастатическому распространению.
• Посттрансляционные модификации включают обширное N- и O-связанное гликозилирование, из-за которого видимой молекулярная масса белка при электрофорезе в SDS-ПААГ выше предсказанных 37 кДа. Белок также содержит дисульфидные связи и сигнальный пептид.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Используемый иммуноген представляет собой синтетический пептид (аа 100‑200 человеческого CD68), что указывает на то, что антитело распознает линейный эпитоп. Для вестерн-блоттинга подойдут стандартные восстанавливающие и денатурирующие условия; однако из-за интенсивного гликозилирования наблюдаемая полоса может мигрировать выше предсказанных 37 кДа. При необходимости рекомендуется использовать дегликозилирующие ферменты для подтверждения специфичности связывания.
• Для иммунофлуоресценции на парафиновых срезах (IF‑P) и иммуногистохимии (IHC‑P) рекомендуется проведение демаскировки антигена, поскольку CD68 является мембранным белком, часто локализованным во внутриклеточных компартментах. Оптимизируйте фиксацию (например, 4% параформальдегид или формалин) и пермеабилизацию для обеспечения доступа антитела к эпитопу в эндосомах/лизосомах.
• При использовании этого антитела в ИФА валидируйте его характеристики на рекомбинантном белке CD68 или лизатах клеточных линий, экспрессирующих CD68 (например, моноциты/макрофаги линии THP‑1), чтобы подтвердить чувствительность и специфичность.
• Поскольку CD68 является маркером макрофагов, включите соответствующие положительные (например, лизаты человеческих макрофагов) и отрицательные (например, образцы с нокаутом CD68 или изотипные контроли) контролив все эксперименты для подтверждения специфичности связывания с мишенью.

CamelBio: ваш универсальный поставщик антител и реагентов

CamelBio оптимизирует закупку сырья для производства ИВД тест-систем в области исследования макрофагов и опухолевых маркеров, предлагая валидированные моноклональные и поликлональные антитела, такие как этот клон против CD68, а также оптимизированные пары для ИФА и вспомогательные реагенты. Основываясь на модели универсальной цепочки поставок, мы гарантируем стабильное качество, возможность поставки крупных партий и технические консультации, чтобы помочь разработчикам диагностических систем ускорить переход от концепции к клиническому применению.