Моноклональное кроличье антитело против Cas9 для WB, IF/ICC, ELISA — Q99ZW2

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический фон: функция и локализация Cas9

• Cas9 (CRISPR-ассоциированная эндонуклеаза Cas9/Csn1) — это РНК-направляемая ДНК-эндонуклеаза с молекулярной массой 158,4 кДа, формирующая ферментативное ядро адаптивной иммунной системы CRISPR-Cas типа II у Streptococcus pyogenes. Связанные публикации: PMID:21455174
• В своей естественной биологической роли Cas9 защищает бактерии от инвазивных плазмид и вирусной ДНК, встраивая короткие чужеродные последовательности (спейсеры) в локусы CRISPR и обеспечивая генетическую память для последовательностно-специфического иммунитета. Связанные публикации: PMID:21455174
• Для связывания с целевой ДНК и проявления нуклеазной активности Cas9 требуются две малые РНК — CRISPR-РНК (crRNA) и трансактивирующая crRNA (tracrRNA); в отсутствие этих направляющих РНК фермент каталитически неактивен. Связанные публикации: PMID:24270795 PMID:24476820
• Распознавание мишени определяется коротким мотивом, соседствующим с протоспейсером (PAM; 5'-NGG-3'), расположенным в пределах повтора CRISPR и позволяющим отличать собственную ДНК от чужеродной; связывание PAM инициирует разделение цепей ДНК и образование гетеродуплекса. Связанные публикации: PMID:24476820
• После распознавания PAM Cas9 катализирует эндонуклеолитическое расщепление целевой цепи, некомплементарной crRNA, с последующим экзонуклеолитическим укорочением в направлении 3'-5'; оба нуклеазных этапа зависят от ионов магния или марганца. Связанные публикации: PMID:24476820
• При созревании CRISPR-РНК Cas9 не катализирует процессинг; он стабилизирует дуплекс пре-crRNA:tracrRNA, обеспечивая его точное расщепление рибонуклеазой III хозяина. Связанные публикации: PMID:24270795

Рекомендации по экспериментам и технические советы

• Иммуноген охватывает аминокислоты 450–730 Cas9 — область, включающую нуклеазный домен HNH и домен взаимодействия с PAM. Для вестерн-блоттинга рекомендуется использовать лизаты клеток, трансфицированных Cas9, или очищенный полноразмерный рекомбинантный Cas9 в качестве положительного контроля; прогнозируемая молекулярная масса составляет 158 кДа.
• При иммунофлуоресценции/ICC локализация Cas9 может варьироваться в зависимости от направляющей РНК и мишени. Оптимизируйте условия фиксации и пермеабилизации с использованием соответствующих контролей и подтвердите специфичность с помощью клеточных линий с нокаутом или нокдауном Cas9, если они доступны.
• Для ELISA рекомбинантный фрагмент Cas9 можно использовать для построения стандартной кривой; однако перед количественным применением необходимо оценить перекрёстную реактивность с эндогенным Cas9 или другими представителями семейства в соответствующей биологической матрице.
• Предполагается, что это антитело обладает широкой перекрёстной реактивностью, в том числе с Cas9 человека. При использовании образцов других видов рекомендуется предварительная валидация для подтверждения ожидаемой реактивности.

CamelBio: ваш универсальный партнёр по подбору материалов

CamelBio обеспечивает производителей диагностических систем, исследовательские лаборатории и биотехнологические компании универсальным доступом к высококачественному сырью для IVD, техническим услугам и консультационной поддержке, сопровождая проекты от концепции до клинического применения. Это моноклональное антитело против Cas9 предназначено для исследований на основе CRISPR, разработки инструментов редактирования генов и создания диагностических тестов. Мы предлагаем валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, вспомогательные реагенты в больших объёмах и поиск сырья для редких мишеней, чтобы оптимизировать ваш рабочий процесс.