Кроличья моноклональная антитела против Cas9 для WB, ИФА — Q99ZW2

Основные технические характеристики и параметры продукта

Биологическая справка: функция и локализация Cas9

• Cas9 (КРИСПР-ассоциированная эндонуклеаза Cas9/Csn1) — это ДНК-эндонуклеаза с направляющей РНК, которая является эффекторным белком адаптивной иммунной системы типа II CRISPR-Cas у Streptococcus pyogenes.
  Связанные публикации: PMID:21455174
• В пути интерференции CRISPR Cas9 образует комплекс с CRISPR РНК (crРНК) и транс-активирующей crРНК (tracrРНК). Этот комплекс, направляемый двухкомпонентной РНК, распознает и расщепляет двухцепочечные участки ДНК, комплементарные спейсерной последовательности crРНК.
• Распознавание и расщепление мишени требует короткой последовательности PAM (протоспайсерный соседний мотив) (5’-NGG-3’ для SpCas9), расположенной непосредственно ниже сайта связывания мишени. Распознавание PAM критически важно для каталитической активности и помогает отличить собственную ДНК от чужеродной.
  Связанные публикации: PMID:24476820
• Помимо расщепления ДНК, Cas9 также участвует в созревании crРНК. Вместе с tracrРНК и рибонуклеазой III хозяина он стабилизирует дуплекс пре-crРНК:tracrРНК для корректной процессинга, хотя сам Cas9 не выполняет каталитической функции при расщеплении РНК.
  Связанные публикации: PMID:24270795
• Cas9 является мультидоменным белком с активностью ДНК-связывания, эндонуклеазы и экзонуклеазы. Его нуклеолитические функции зависят от двухвалентных металлических ионов, таких как магний или марганец.
• Структура Cas9 детально охарактеризована с высоким разрешением: белок обладает конформационной гибкостью, которая обеспечивает его участие в связывании РНК, раскручивании ДНК и скоординированном расщеплении через два нуклеазных домена (RuvC и HNH).
• Нативная молекулярная масса Cas9 составляет около 158 кДа, что соответствует его большой мультидоменной архитектуре.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуноген включает аминокислоты 450–730 Cas9 Streptococcus pyogenes, то есть участок, содержащий фрагмент нуклеазного домена RuvC. Учитывайте, что антитело может распознавать как нативную, так и денатурированную форму белка Cas9.
• При вестерн-блоттинге предсказанная молекулярная масса полноразмерного Cas9 составляет ~158 кДа; проводите валидацию реактивности в релевантной системе образцов (например, лизаты S. pyogenes или генетически модифицированные клеточные линии, экспрессирующие SpCas9).
• При разработке ИФА оценивайте эффективность антитела в взаимодействии с рекомбинантным белком Cas9 или клеточными экстрактами. Указанная перекрестная реактивность (человек, другие виды) указывает на возможность применения антитела в работах с человеческими клеточными линиями или тканями, экспрессирующими экзогенный Cas9.

CamelBio: ваш универсальный поставочный мост

CamelBio предоставляет производителям диагностики, лабораториям и научно-исследовательским институтам универсальный доступ к сырью для ИВД (in vitro диагностики), техническим услугам и консалтингу — мы сопровождаем проекты на всех этапах от идеи до клинических испытаний. Для стремительно развивающейся области CRISPR-диагностики CamelBio поставляет высококачественные моноклональные антитела, такие как эта антитела против Cas9, а также комплексные решения по сырью, включая валидированные пары антител, оптимизированные реагенты в больших объемах и подбор редких мишеней под заказ. Наша интегрированная модель поставок позволяет преодолеть разрыв между исследовательскими инновациями и разработкой клинических тест-систем.