Поликлональное кроличье антитело против ATP7B для WB, IHC-P, ELISA - P35670

Основные характеристики и параметры продукта

Биологическая справка: функция и локализация ATP7B

• Идентификация белка: ATP7B, также известный как медьтранспортирующая АТФаза 2 или белок, ассоциированный с болезнью Вильсона, представляет собой медьтранспортирующую АТФазу P-типа, кодируемую геном ATP7B (GeneID 540). Он относится к подсемейству P1B АТФаз, транспортирующих тяжелые металлы.
• Основная функция: ATP7B опосредует зависимый от АТФ экспорт меди из клеток, что имеет решающее значение для поддержания гомеостаза меди. В гепатоцитах он облегчает выход меди в желчь, особенно при повышении внутриклеточного уровня меди, предотвращая тем самым токсическое накопление.
• Субклеточная локализация: при базальных концентрациях меди ATP7B преимущественно располагается в мембране транспортной сети Гольджи (ТНГ), где он поставляет медь купроферментам. При перегрузке медью он транслокируется в цитоплазматические везикулы и плазматическую мембрану, а также в поздние эндосомы и митохондрии для экспорта избытка меди.
• Тканевая экспрессия: ATP7B наиболее выражен в печени и почках, с более низкой экспрессией в мозге. Также обнаружены специфичная для мозга изоформа (изоформа 2) и протеолитически расщепленная форма размером 140 кДа (WND/140 кДа).
• Пост-трансляционные модификации и регуляция: белок подвергается фосфорилированию и альтернативному сплайсингу, а событие рибосомального сдвига рамки считывания может приводить к образованию дополнительных вариантов. Эти модификации влияют на его траффик и каталитическую активность.
• Клиническое значение: Мутации в гене ATP7B вызывают болезнь Вильсона (WD) — аутосомно-рецессивное заболевание, характеризующееся накоплением меди в печени и мозге, что приводит к развитию печеночных и неврологических симптомов. Антитело нацелено на область рядом с C-концом (а.о. 1251-1351), что позволяет детектировать как полноразмерную, так и расщепленную форму белка.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: иммуноген охватывает аминокислоты 1251–1351 в C-концевой области, которая хорошо консервативна у разных видов (это объясняет перекрестную реактивность с мышью и крысой). Согласно топологическим моделям, эта область предположительно располагается в цитоплазме, что позволяет получить антитела, распознающие как полноразмерный белок, так и его C-концевой фрагмент.
• Вестерн-блоттинг: прогнозируемая молекулярная масса ATP7B составляет ~157 кДа. Используйте гель с низкой концентрацией акриламида (например, 6–8%) и обеспечьте достаточные условия переноса (например, мокрый перенос со сниженной концентрацией метанола) для белков с высокой молекулярной массой. Антитело может также детектировать расщепленную форму 140 кДа (WND/140) в печени или клеточных линиях.
• IHC-P: Оптимизируйте демаскировку антигена (например, термическая обработка в цитратном или ЭДТА буфере) и включите соответствующие контроли (например, ткань печени как положительный контроль, изотипный контроль). Окрашивание в гепатоцитах должно локализоваться в ТНГ и показывать перераспределение при воздействии повышенных концентраций меди.
• ELISA: Рекомбинантный иммуноген можно использовать в качестве стандарта для количественных анализов. Валидируйте линейность и чувствительность с использованием лизатов клеток, нагруженных медью или сверхэкспрессирующих ATP7B.

CamelBio: ваш универсальный мост для закупок реагентов

CamelBio предоставляет обширный портфель сырья для производства диагностических систем, включая это антитело против ATP7B, для разработки диагностических и исследовательских инструментов, направленных на изучение нарушений метаболизма меди, таких как болезнь Вильсона. Помимо антител, мы предлагаем валидированные пары антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные реагенты, крупные партии вспомогательных реагентов и кастомный поиск редких мишеней, поддерживая ваш проект от открытия до клинического применения. Сотрудничайте с CamelBio, чтобы оптимизировать вашу цепочку поставок и ускорить разработку анализов.