Кроличье моноклональное антитело к ацетил-гистону H3-K27 (Q16695/P68431) для Вестерн-блоттинга (WB), ChIP, IF, IHC

Основные спецификации и параметры продукта

Биологическое обоснование: Функция и локализация гистона H3 (H3.1/H3.1t)

• Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы, фундаментальной повторяющейся единицы хроматина. Нуклеосомы наматывают и уплотняют ДНК, тем самым регулируя доступ к генетическому материалу для транскрипции, репликации ДНК, репарации и рекомбинации. Такая архитектура необходима для стабильности хромосом и правильного функционирования клетки. Связанные ссылки: UniProt Q16695, UniProt P68431.

• У человека существует множество неаллельных вариантов гистона H3, включая канонические зависимые от репликации белки H3.1 (кодируемые генами, такими как H3C1, H3C2 и т. д., GeneIDs: 8350, 8290) и специфичный для тестикул вариант H3.1t (кодируемый геном H3-4, также известным как H3FT, HIST3H3). Канонический H3.1 экспрессируется повсеместно, тогда как экспрессия H3.1t ограничена клетками семенников. Связанные ссылки: UniProt Q16695 (тканевая специфичность).

• Как H3.1, так и H3.1t локализуются в ядре и ассоциируются с хромосомами. Они содержат гистоновый домен, опосредующий их встраивание в нуклеосомы, и N-концевой хвост, который выступает из нуклеосомы, служа платформой для множества посттрансляционных модификаций (PTM). Связанные ссылки: UniProt P68431.

• N-концевой хвост гистона H3 подвергается обширным посттрансляционным модификациям, включая ацетилирование, метилирование, фосфорилирование, цитруллинизацию и другие, которые в совокупности известны как «гистоновый код». Эти модификации регулируют динамику хроматина и паттерны экспрессии генов. Ацетилирование остатков лизина, например, в позиции 27 (K27), является характерной чертой активных районов хроматина, включая энхансеры и промоторы, способствуя открытой конфигурации хроматина, которая способствует активации генов. Связанные ссылки: UniProt P68431 (обзор PTM).

• Описанное здесь антитело было получено с использованием синтетического пептида, соответствующего ацетилированному лизину 27 человеческого гистона H3 (изоформа H3.1, NP_003520.1). Оно специфически распознает ацетилированную форму и подходит для обнаружения этой модификации в различных применениях.

Экспериментальное руководство и технические советы

• Это антитело было получено с использованием синтетического ацетилированного пептидного иммуногена; учитывайте, что оно может распознавать эпитоп как в линейной (денатурированной), так и в нативной конформации, что делает его подходящим для таких методов, как Вестерн-блоттинг (WB), иммунопреципитация и анализы на основе хроматина.
• Для Вестерн-блоттинга (WB) предсказанный молекулярный вес гистона H3 составляет ~15 кДа. Однако гистоны могут мигрировать аномально в зависимости от условий геля; включите соответствующие положительные контроли (например, лизат цельных клеток HeLa) и маркеры молекулярного веса.
• В анализах иммунопреципитации хроматина (ChIP) и CUT&Tag подтвердите специфичность и эффективность антитела, проведя конкуренцию пептидами и включив известные локусы-мишени (например, активные энхансеры, маркированные H3K27ac) в качестве положительных контролов.
• Учитывая широкую предсказанную перекрестную реактивность (Человек, Мышь, Крыса и другие), это антитело может подходить для различных видов, но рекомендуется валидация в конкретной образцовой системе.
• Для иммунофлуоресценции (IF/ICC) и иммуногистохимии (IHC-P) доступность эпитопа может зависеть от протоколов фиксации и пермеабилизации; рекомендуется оптимизация этих этапов.
• Эффективность антитела в ИФА (ELISA) и дот-блоттинге (DB) можно оценить с использованием ацетилированных и неацетилированных пептидов для оценки специфичности.

CamelBio: Ваш мост для закупок полного цикла

CamelBio — это специализированный партнер по закупке сырья для IVD, предоставляющий производителям диагностических средств, лабораториям и научно-исследовательским институтам беспрепятственный доступ к комплексному портфелю антител, антигенов и вспомогательных реагентов. В области исследований эпигенетики и модификаций гистонов CamelBio предлагает валидированные ацетил-специфические антитела, оптимизированные пары моноклональных и поликлональных антител, а также вспомогательные реагенты оптом для поддержки ваших потребностей в разработке анализов. От рутинных закупок до поставок сырья для редких мишеней, наша платформа поддерживает ваш проект от идеи до клиники благодаря оптимизированной и надежной цепочке поставок.