Кроличье моноклональное антитело к ацетилированному гистону H3-K18 (Q16695/P68431) | Валидировано для WB, IHC, ChIP, ELISA

Основные характеристики и параметры продукта

Биологический контекст: функция и локализация гистона H3

• Гистон H3 — это основной нуклеосомный белок, который упаковывает и уплотняет ДНК в хроматин, ограничивая доступ к ДНК-зависимым системам и играя центральную роль в регуляции транскрипции, репарации ДНК, репликации ДНК и поддержании стабильности хромосом. Связанные источники: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Гистон H3 локализуется в ядре и ассоциирован с хромосомами. Связанные источники: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Канонический вариант H3.1 кодируется несколькими генами (например, H3C1, H3C2) и экспрессируется в соматических клетках зависимым от репликации образом. Вариант H3.1t (Q16695) специфически экспрессируется в клетках тестикул. Связанные источники: UniProtKB Q16695

• Гистон H3 подвергается обширным посттрансляционным модификациям, которые составляют "гистоновый код". Ацетилирование K18 (позиция 19 в канонической последовательности H3) является ключевой меткой, связанной с активацией транскрипции и репарацией ДНК. Эта модификация динамически регулируется гистонацетилтрансферазами (HAT) и гистондеацетилазами (HDAC). Ацетилирование в этом сайте было подтверждено во множестве исследований. Связанные источники: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Иммуногеном является синтетический ацетилированный пептид, соответствующий области K18 гистона H3 человека. Полученное кроличье моноклональное антитело, как ожидается, специфично распознает ацетилированный H3K18, не проявляя перекрестной реакции с немодифицированным K18 или другими сайтами ацетилирования. Специфичность рекомендуется валидировать с помощью конкурентного анализа с ацетилированным и неацетилированным пептидами или после обработки клеток ингибиторами HDAC.
• При вестерн-блоттинге (WB) ожидается получение одной полосы с молекулярной массой ~16 кДа. Для нормализации уровня ацетилирования используйте подходящие контрольные нагрузки (например, тотальный гистон H3 или антитела к C-концу H3). Сигнал ацетилирования можно усилить предварительной обработкой клеток ингибиторами деацетилаз, такими как трихостатин А (TSA) или бутират натрия.
• Для иммуногистохимии (IHC-P) и иммунофлуоресценции (IF/ICC) оптимизируйте условия экспозиции антигена и пермеабилизации. Для IHC-P рекомендуется тушение эндогенной пероксидазы. Валидируйте специфичность окрашивания путем сравнения с контролем изотипа.
• Для иммунопреципитации хроматина (ChIP) убедитесь, что условия сшивки оптимизированы для анализа гистоновых модификаций. Используйте подходящие позитивные и негативные контрольные локусы (например, активно транскрибируемые гены против сайленсированных локусов). Эффективность обогащения можно проверить с помощью ПЦР в реальном времени.
• Учитывая прогнозируемую широкую перекрестную реактивность (человек, мышь, крыса и другие виды), подтвердите реактивность у интересующего вида перед началом крупномасштабных экспериментов. Выравнивание последовательностей показывает высокую консервативность области, окружающей K18, у всех позвоночных.
• Для применения в ELISA и дот-блоттинге (DB) антитело можно использовать для детекции ацетилированных пептидов H3K18 или рекомбинантных гистонов. Для усиления сигнала рекомендуется использовать биотинилированное вторичное антитело и стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой.

CamelBio: ваш единый центр закупок

CamelBio — ведущий поставщик сырья для производства ИВД, поддерживающий диагностических производителей, исследовательские лаборатории и институты на всех этапах — от разработки концепции до клинического применения. Мы предлагаем обширный портфель валидированных пар антител, оптимизированные моноклональные и поликлональные антитела, объемные поставки вспомогательных реагентов и специализированный поиск редких мишеней. Для ваших исследований в области эпигенетики и хроматина, включая антитела к ацетилированным гистонам, такие как это кроличье моноклональное антитело к ацетилированному гистону H3-K18, CamelBio предоставляет надежные закупки и персональную поддержку, чтобы ускорить разработку ваших тест-систем и открытие биомаркеров.